基于蛋白质组技术筛选的日本血吸虫鸟氨酸氨基转移酶和亲免素的克隆表达及其诊断应用

发布时间：2019-03-12 20:50

【摘要】：目的 为寻找新的血吸虫病免疫诊断候选抗原分子,对基于蛋白质组技术筛选出的日本血吸虫鸟氨酸氨基转移酶(SjOAT)和亲免素(SjIP)进行体外重组表达、纯化。通过初步的实验室检测评估重组蛋白rSjOAT和rSjIP在日本血吸虫病免疫诊断中的应用价值。 方法 以日本血吸虫成虫cDNA为模板,体外扩增SjOAT和SjIP目的基因,以pET28a为载体转化入大肠杆菌系统中;异丙基-B-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导融合蛋白表达,优化重组菌的诱导表达条件;大量诱导表达后,应用Ni2+亲和层析法纯化rSjOAT、rSjIP; SDS-PAGE和Western blotting验证表达量和免疫活性。应用重组抗原间接ELISA诊断日本血吸虫病,并与日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)的间接ELISA平行检测,比较两种方法之间的敏感性、特异性和交叉反应性的差异。 结果 成功构建了表达型重组质粒pET28a/SjOAT和pET28a/SjIP,经IPTG诱导培养,证实构建的两种质粒均能表达。SDS-PAGE电泳分析可见相对分子质量约50KDa和55KDa处有SjOAT、SjIP融合蛋白的表达;Western blotting检测结果表明rSjOAT、rSjIP能被抗His-tag单克隆抗体、血吸虫病患者血清识别。纯化后的SjOAT蛋白浓度达0.53，

本文编号：2439137