转录因子Foxp1对树突状细胞分化和功能的调控作用及其机制研究

发布时间：2019-04-02 17:55

【摘要】：树突状细胞（Dendritic cells，DCs）是目前已知机体功能最强大的抗原提呈细胞（antigen presenting cells，APC），DCs的功能及免疫效应的发挥与其成熟状态密切相关。寻找DCs分化发育的关键转录因子是免疫学领域的热门课题。目前得到公认的在免疫细胞分化发育中具有重要作用的转录因子是调节性T细胞（Treg）的标志性分子Foxp3，它是叉头盒（Forkhead box，Fox）家族的成员，通过直接调控多种基因的表达来调节Treg的活性，该基因突变能引起严重的自身免疫性疾病。本室在前期研究中曾通过测序分析了DCs表达的各种转录调控因子，其中，DCs表达的叉头盒家族的另一个成员Foxp1引起了我们的关注。已知Foxp1能参与了抗原提呈细胞B细胞、单核细胞的分化和巨噬细胞功能的发挥。单核细胞分化至巨噬细胞过程中伴有Foxp1的表达下调，而DCs与巨噬细胞拥有共同的前体，我们的预实验结果显示DCs分化成熟过程中Foxp1的表达增强，因此，我们推测DCs的分化发育可能也与Foxp1有一定关系。 首先，，本课题通过蛋白质印迹技术观察到随着小鼠骨髓来源的DCs分化成熟，Foxp1蛋白的表达量逐渐增加，这提示Foxp1可能在DCs的分化发育过程中具有一定的调节作用。而阻断Foxp1在DCs中的表达有助于深入分析其在DCs分化发育中的功能，因此本课题合成了3对针对Foxp1的干扰小RNA，转染小鼠成纤维细胞MEFs，在蛋白水平检测干扰效率，发现一对干扰效率较高的小RNA分子，遂以该片段构建重组干扰腺病毒和干扰慢病毒。实验结果显示干扰腺病毒有较高的感染效率，并能有效干扰Foxp1的表达，而干扰慢病毒的效果不佳，因此我们用干扰腺病毒进行后续研究。考虑到腺病毒本身对DCs的成熟具有促进作用，因此我们使用不带有干扰片段的空载腺病毒Ad-ctrl作为阴性对照，将重组干扰腺病毒Ad-simFoxp1高效转入未成熟DCs以观察阻断Foxp1对DCs分化发育及功能的影响。结果表明阻断Foxp1表达的DCs其共刺激分子CD80、CD86、CD40的表达明显下调。与成熟DCs相比，阻断Foxp1表达的DCs吞噬能力增强，表现出多种细胞因子分泌减少，与T细胞混合培养时刺激T细胞增殖能力减弱，促进抗原特异性T细胞增殖的能力也降低，表现为对DCs功能的调节作用。 进一步利用建立的实验性自身免疫性脑脊髓炎模型（EAE），观察了阻断Foxp1表达的DCs对EAE小鼠发病的影响。实验结果显示，阻断Foxp1表达的DCs过继转移至小鼠腹腔后能明显推迟小鼠EAE发病时间，与对照组相比，临床神经功能评分也有所改善，表明阻断Foxp1表达的DCs过继转移小鼠体内能推迟MOG35-55抗原肽诱导的EAE发病时间，并降低DCs促进EAE发病的能力。 综上所述，本课题对叉头盒转录因子Foxp1对DCs的分化发育和免疫功能及其机制进行了研究，发现Foxp1在DCs的分化发育过程中表达逐渐增强，阻断其表达能通过下调共刺激分子并广泛抑制细胞因子分泌实现对DCs功能的调节。阻断Foxp1表达的DCs过继转移机体能发挥一定的免疫抑制功能。这为免疫相关性疾病的治疗提供了新的思路。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：第二军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R392

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本文编号：2452771