新西兰兔脊柱结核模型的构建及评价相关实验研究

发布时间：2019-04-09 17:46

【摘要】：目的在新西兰白兔第4腰椎上终板钻孔、种植人型结核杆菌H37Rv标准菌株，构建新西兰兔脊柱结核模型，为脊柱结核的临床与基础研究提供动物模型；并通过影像学、病理学、细菌学来评价，探讨提供新西兰兔脊柱结核模型成功率的相关方法。方法42只新西兰兔分为三组，实验组20只，对照组20只，空白组2只。弗氏完全佐剂注射至新西兰兔颈根部背侧皮内，1个月后在已致敏的新西兰兔的腰4椎体上方近椎间盘处钻孔，以明胶海绵填充，实验组内注入浓度为5mg/ml的结核杆菌混悬液0.1ml（菌量为1×10~7CFU/ml）；对照组内注入液体培养基与生理盐水混合液0.1ml。空白组不做任何处理。术后观察实验兔一般情况，并于术后4w、8w通过影像学、组织病理学、细菌学培养等方法评价来证实新西兰兔脊柱结核模型成功率。结果术中除实验组内1只实验兔因麻醉时空气栓塞致死外，其余37只实验兔手术顺利。实验组内4只出现消瘦、纳差等症状；1只实验兔于1个月后进食不佳，五天后死亡；1只实验兔于术后49天死亡，解剖发现胸腔内有大量脓液，肺脏表面弥散大小不等结节。其余实验兔活动好，精神及进食好，术后2月15只实验兔存活，存活率为88.2%(15/17)。对照组内20只实验兔有1只术后麻醉未恢复当日死亡。1只兔术后进食、饮水不佳于术后第13天死亡。其余18只兔术后平稳，进食良好，体重无明显变化。术后2月18只实验兔存活，存活率为94.7%(18/19)。空白组内实验兔活动好，精神及进食好，2月2只实验兔存活，存活率为100%(2/2)。实验组内实验兔在腰椎感染H37Rv标准结核杆菌后，兔椎体骨破坏于术后4w即被发现。术后4w X线观察阳性兔8只（8/17），8w阳性兔10只（10/15）。术后4w重建CT观察阳性兔15只（15/17），8w阳性兔为15只（15/15）。术后4wMRI观察阳性兔为13只（13/17），，8w阳性兔15只（15/15）。对照组内所有实验兔术后8w内未发现椎体骨破坏。术后8w在麻醉下解剖实验组内实验兔，见所有实验兔伤口愈合良好，无皮肤窦道形成。12只实验兔腰大肌无脓肿，剥离椎前肌与椎体粘连后，未见椎体上端孔洞，可见椎间盘前方纤维环颜色发暗、凹陷，椎体骨质改变，椎间隙略变窄（正常椎间盘纤维环为瓷白色，膨隆感）。其中3只腰大肌有0.5cm～1.0cm脓肿，为黄白色，脓肿内有砂砾样感。椎旁软组织有肉芽组织生成。见2只实验兔L3-4椎间盘与上下终板粗大，凸向前方，明显骨质破坏。取病变椎体、肉芽组织和脓肿行病理检查，HE染色发现有死骨、大量炎症反应，淋巴细胞浸润、类上皮样细胞或坏死灶等形成，但无多核巨细胞反应和典型的结核结节形成。实验组内兔椎旁肉芽组织匀浆后通过自制罗氏培养基培养，6w内有73.3％结核分枝杆菌生长。通过影像学、大体观察、病理学和细菌学培养，综合评价新西兰兔脊柱结核模型成功率为88.2％（15/17）。结论新西兰兔经过弗氏完全佐剂致敏，在兔脊柱椎体局部种植适当剂量的H37Rv结核标准菌株，通过影像学、组织病理、细菌学等检查证实，能够构建出与人类脊柱结核的病理变化相似的兔脊柱结核模型，为脊柱结核临床和基础研究提供理想的实验动物模型。
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【学位授予单位】：宁夏医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R529.2;R-332

【参考文献】