转录因子TBX18对乳鼠成纤维细胞的重编程作用

发布时间：2019-04-15 17:17

【摘要】：目的探讨窦房结促生长转录因子TBX18对乳鼠心脏成纤维细胞的重编程作用。方法构建携带人TBX18基因的重组腺病毒载体(Ad-TBX18)及只带有绿色荧光蛋白的腺病毒载体(Ad-GFP),转染乳鼠心脏成纤维细胞(CFs),分成实验组A(CFs-TBX18)、对照组B(CFs—GFP)和空白对照组C(CFs)。各组细胞培养8 d观察形态学变化并检测HCN4蛋白、Cox43蛋白及Cox45蛋白的表达情况;再检测心肌肌钙蛋白1(cTn1)蛋白的表达量并记录细胞内钙火花的数量;最后检测α-SMA蛋白的表达及Vimentin蛋白的荧光分布。结果成纤维细胞转染Ad—GFPTBX18后其形态学和搏动功能均未向iSANs转化。转染TBX18的成纤维细胞HCN4表达明显增高,Cox43与Cox45蛋白表达下调。钙火花检测结果显示,空白对照组细胞内有钙火花,而实验组和对照组中均未发现钙火花。cTn1蛋白检测结果表明,实验组中无cTn1蛋白表达。免疫荧光检测显示,各组中均有Vimentin蛋白的红色荧光,实验组中α-SMA高表达,而对照组α-SMA表达明显降低。结论 CFs经TBX18转染后可重编程为高表达HCN4蛋白,和低表达COX43、45蛋白表达较低的肌成纤维细胞(MCFs)。
[Abstract]:Objective to investigate the reprogramming effect of sinoatrial node growth stimulating transcription factor (TBX18) on cardiac fibroblasts of neonatal rats. Methods Recombinant adenovirus vector (Ad-TBX18) carrying human TBX18 gene and adenovirus vector containing only green fluorescent protein (Ad-GFP) were constructed and transfected into neonatal rat cardiac fibroblasts (CFs),) and divided into experimental group A (CFs-TBX18). Control group B (CFs-GFP) and blank control group C (CFs). The morphological changes and the expression of HCN4 protein, Cox43 protein and Cox45 protein were observed in each group on the 8th day, then the expression of cardiac troponin 1 (cTn1) protein was detected and the number of calcium sparks in the cells was recorded. Finally, the expression of 伪-SMA protein and the fluorescence distribution of Vimentin protein were detected. Results the morphology and pulsatile function of fibroblasts transfected with Ad-GFPTBX18 were not transformed into iSANs. The expression of HCN4 was increased and the expression of Cox43 and Cox45 protein was down-regulated in fibroblasts transfected with TBX18. The results of calcium spark detection showed that there was no calcium spark in the blank control group, but no calcium spark was found in both the experimental group and the control group. The results of cTn1 protein detection showed that there was no expression of cTn1 protein in the experimental group. Immunofluorescence assay showed that there was red fluorescence of Vimentin protein in all groups. The expression of 伪-SMA in the experimental group was higher than that in the control group, but the expression of 伪-SMA in the control group was significantly decreased. Conclusion CFs can be reprogrammed into myoblasts with high expression of HCN4 protein and low expression of COX43,45 protein after transfection with TBX18, and the myoblasts with low expression of COX43,45 protein can be reprogrammed to express (MCFs).
【作者单位】： 武汉大学人民医院心内科/武汉大学心血管研究所/湖北省心血管重点实验室;十堰市太和医院心内科;
【基金】：湖北省科技支撑计划项目(2013BCB013) 国家自然科学基金面上项目(81270249);国家自然科学基金面上项目(81570306)
【分类号】：R329.2

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