【摘要】：背景与目的 结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis，M.tb）RD2区编码抗原：培养滤液蛋白21（Culture filtrate protein21，CFP21）和M.tb主要蛋白64（Major proteinof mycobacterium tuberculosis64，MPT64），仅在M.tb和部分BCG菌株中表达。M.tb RD1区编码抗原：培养滤液蛋白10（Culture filtrate protein10，CFP10）和6kDa早期分泌性靶抗原（6kDa Early secretary antigenic target，ESAT-6），存在于M.tb早期培养滤液里，且在全部BCG菌株及绝大部分非结核分枝杆菌（Nontuberculosis mycobacteria，NTM）不表达。HspX是M. tb休眠期或潜伏感染期高表达的蛋白。我们在前期的研究工作中，通过基因工程技术，分别将HspX、或CFP21和MPT64，ESAT6和CFP10构建成CFP21-MPT64（rCM）和ESAT-6-CFP10（rEC）融合蛋白，在大肠杆菌中表达纯化。本课题以这三种蛋白为基础建立诊断M.tb感染的全血IFN-γ释放试验（Whole-blood IFN-γ assay，WBIA）并初步评价这种诊断方法的诊断价值，为进一步的临床试验奠定基础。 方法 1. rCM、rEC和rHspX蛋白的纯化、定量和鉴定； 2.健康人（Health）、结核杆菌潜伏感染人群（LTBI）和痰涂片阳性结核病患者（SPTB）的筛查和鉴定； 3.全血IFN-γ释放试验（WBIA）检测受检者血清中IFN-γ的含量，用spss17.0分析软件进行统计分析，评价rCM-WBIA、rEC-WBIA和rHspX-WBIA单独和联合使用诊断M.tb的价值。 结果 1成功纯化rCM、rEC和rHspX蛋白。冻干后，用1mL1×PBS溶解并过滤除菌并将蛋白保存于-20℃待用。纯化产物的大小和纯度，经SDS-PAGE电泳鉴定符合预期。 2Health选用同济医学院2012级新生，新乡市和济宁市结核病防治所共120人，临床体格检查正常，胸部X光检查正常，TST阴性。LTBI选用同济医学院2012级新生，新乡市和济宁市结核病防治所共92人，临床体格检查正常，胸部X光检查正常，TST阳性，痰涂片阴性。SPTB选用新乡市和济宁市结核病防治所共43人，有明显临床症状，胸部X光检查有结核病灶，TST阳性或强阳性，痰涂片阳性。 3rCM分别刺激Health，LTBI和SPTB的全血释放的IFN-γ含量的Mean±sd分别为117.3±116.8pg/mL，790.7±876.5pg/mL和728.5±672.0pg/mL；SPTB和Health以及LTBI与Health之间有显著统计学意义（p＜0.001）。rEC分别刺激Health， LTBI和SPTB的全血释放的IFN-γ含量的Mean±sd分别为119.3±105.0pg/mL，961.3±1112.8pg/mL和1050.9±917.6pg/mL；SPTB和Health以及LTBI与Health之间有显著统计学意义（p＜0.001）。rHspX分别刺激Health，LTBI和SPTB的全血释放的IFN-γ含量的Mean±sd分别为25.8±76.7pg/mL，86.5±251.7pg/mL和130.2±208.5pg/mL；LTBI与Health，以及SPTB与Health之间有显著统计学意义（p＜0.001）。PHA分别刺激Health，LTBI和SPTB的全血释放的IFN-γ含量的Mean±sd分别为1274.1±1665.0pg/mL，2604.4±1805.7pg/mL和2456.2±2985.8pg/mL；SPTB与Health之间有显著统计学意义（p＜0.05）。 4rCM-WBIA和rEC-WBIA单独诊断总人群中的M.tb感染人群（包括SPTB和LTBI）：受试者工作特征（Receiver Operating Characteristic，ROC）曲线下面积（Area under curve，AUC）分别为0.855和0.877，cut-off值分别为393.4pg/mL和352.2pg/mL，灵敏度分别为64.4%和74.8%，特异度分别为100%和98.3%。rCM-WBIA和rEC-WBIA串联（两种方法均为阳性才是阳性）和并联（两种方法之一为阳性即是阳性）诊断总人群中的M.tb感染人群的灵敏度分别为51.1%和87.4%，特异度分别为100%和98.3%。 rCM-WBIA和rEC-WBIA单独诊断M.tb感染人群中的SPTB的灵敏度分别为62.8%和86.0%，特异度分别为35.9%和30.4%。rCM-WBIA和rEC-WBIA串联和并联诊断M.tb感染人群中SPTB的灵敏度分别为60.5%和88.4%，特异度分别为53.3%和13.0%。 5rCM-WBIA和rEC-WBIA单独诊断总人群中的M.tb感染人群一致性极差，符合率为63.7%，κ=0.16。rCM-WBIA和rEC-WBIA单独诊断M.tb感染人群中的SPTB一致性极差，，符合率为72.1%，κ=0.316。 6rHspX-WBIA诊断M.tb感染人群中的LTBI的cut-off值为54.2pg/ml，灵敏度和特异度分别为23.8%和52.6%。 结论 1诊断总人群中的M.tb感染人群宜选用rCM-WBIA和rEC-WBIA并联； 2诊断M.tb感染人群中的SPTB宜选用rCM-WBIA和rEC-WBIA串联； 3rHspX-WBIA对诊断M.tb感染人群中的LTBI无诊断价值。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R378.911
【共引文献】
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本文编号：
2460810
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