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慢病毒介导的siRNA沉默ADAMTS-5在体外培养的大鼠软骨细胞中的作用

发布时间:2019-05-10 17:02
【摘要】:目的:构建ADAMTS-5siRNA慢病毒载体,研究慢病毒载体介导的siRNA对大鼠离体软骨细胞中ADAMTS-5基因表达的影响。 方法:针对ADAMTS-5基因RNAi有效靶点构建大鼠pGCSIL-GFP-ADAMTS-5siRNA表达质粒,使用慢病毒包装系统,在293T细胞中进行包装生产含ADAMTS-5siRNA的慢病毒颗粒,然后转导入大鼠软骨细胞。通过real-time PCR和Westernblot方法检测转导后软骨细胞ADAMTS-5基因mRNA及蛋白表达水平的变化。 结果:成功包装大鼠含ADAMTS-5siRNA慢病毒颗粒。ADAMTS-5siRNA能顺利转入软骨细胞,转染率为80%;从Real-time PCR结果可以看出,大鼠关节软骨细胞中ADAMTS-5mRNA的表达量,干扰组明显低于阴性对照组,差异有显著性意义(P0.05),Western blot结果显示, ADAMTS-5蛋白表达量,干扰组低于阴性对照组,差异有显著性意义(P0.05)。 结论:利用慢病毒载体把ADAMTS-5siRNA转入大鼠软骨细胞,,使软骨细胞的ADAMTS-5基因沉默,为进一步阐明siRNA沉默ADAMTS-5基因防治骨关节炎的分子机制提供基础。
[Abstract]:Aim: to construct ADAMTS-5siRNA lentivirus vector and study the effect of lentivirus vector mediated siRNA on the expression of ADAMTS-5 gene in rat cartilage cells in vitro. Methods: rat pGCSIL-GFP-ADAMTS-5siRNA expression plasmid was constructed according to the effective target of ADAMTS-5 gene RNAi. Lentivirus packaging system was used to produce lentivirus particles containing ADAMTS-5siRNA in 293T cells, and then transferred into rat cartilage cells. The expression of ADAMTS-5 gene mRNA and protein in cartilage cells was detected by real-time PCR and Westernblot. Results: the rat containing ADAMTS-5siRNA lentivirus particles was successfully packaged. ADAMTS-5siRNA could be transferred into cartilage cells successfully, and the transfer rate was 80%. From the results of Real-time PCR, the expression of ADAMTS-5mRNA in rat articular cartilage cells was significantly lower in the interference group than in the negative control group (P 0.05), Western blot). The expression of ADAMTS-5 protein in the interference group was significantly lower than that in the negative control group. The interference group was lower than the negative control group, the difference was significant (P0.05). Conclusion: ADAMTS-5siRNA was transferred into rat cartilage cells by lentivirus vector, and the ADAMTS-5 gene of cartilage cells was silenced, which provided a basis for further elucidating the molecular mechanism of siRNA silencing ADAMTS-5 gene in the prevention and treatment of osteoarthritis.
【学位授予单位】:华中科技大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2012
【分类号】:R684.3;R3416

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