慢病毒介导的siRNA沉默ADAMTS-5在体外培养的大鼠软骨细胞中的作用
[Abstract]:Aim: to construct ADAMTS-5siRNA lentivirus vector and study the effect of lentivirus vector mediated siRNA on the expression of ADAMTS-5 gene in rat cartilage cells in vitro. Methods: rat pGCSIL-GFP-ADAMTS-5siRNA expression plasmid was constructed according to the effective target of ADAMTS-5 gene RNAi. Lentivirus packaging system was used to produce lentivirus particles containing ADAMTS-5siRNA in 293T cells, and then transferred into rat cartilage cells. The expression of ADAMTS-5 gene mRNA and protein in cartilage cells was detected by real-time PCR and Westernblot. Results: the rat containing ADAMTS-5siRNA lentivirus particles was successfully packaged. ADAMTS-5siRNA could be transferred into cartilage cells successfully, and the transfer rate was 80%. From the results of Real-time PCR, the expression of ADAMTS-5mRNA in rat articular cartilage cells was significantly lower in the interference group than in the negative control group (P 0.05), Western blot). The expression of ADAMTS-5 protein in the interference group was significantly lower than that in the negative control group. The interference group was lower than the negative control group, the difference was significant (P0.05). Conclusion: ADAMTS-5siRNA was transferred into rat cartilage cells by lentivirus vector, and the ADAMTS-5 gene of cartilage cells was silenced, which provided a basis for further elucidating the molecular mechanism of siRNA silencing ADAMTS-5 gene in the prevention and treatment of osteoarthritis.
【学位授予单位】:华中科技大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2012
【分类号】:R684.3;R3416
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