金黄色葡萄球菌酚溶调控蛋白α小肽敲除对自溶素AtlA蛋白表达的影响

发布时间：2019-05-21 16:21

【摘要】：目的利用同源重组技术构建金黄色葡萄球菌Newman psmα基因缺失突变株,探究psmα缺失对金黄色葡萄球菌蛋白表达的影响。方法分别扩增psmα基因的上下游同源臂,根据同源重组原理,构建p BT2基因打靶载体,利用同源重组技术,构建psmα缺失的Newman突变株。并对野生株和突变株培养上清蛋白进行研究。结果突变株培养上清中一个相对分子质量约为135×103的蛋白表达水平较野生株明显减少甚至缺失;质谱分析提示该蛋白为金黄色葡萄球菌atl A基因编码的双功能自溶素前体蛋白(Atl A蛋白);实时荧光定量PCR结果显示psmα基因敲除株atl A基因的转录水平较野生株显著降低。结论 psmα缺失后能够降低atl A基因的转录表达水平。
[Abstract]:Objective to construct Staphylococcus aureus Newman psm 伪 gene deletion mutant by homologous recombination technique and to explore the effect of psm 伪 deletion on the expression of Staphylococcus aureus protein. Methods the upstream and downstream homologous arms of psm 伪 gene were amplified respectively. according to the principle of homologous recombination, the targeting vector of p BT2 gene was constructed, and the Newman mutant with psm 伪 deletion was constructed by homologous recombination technique. The culture albumin of wild and mutant strains was studied. Results the expression level of a protein with a relative molecular weight of 135 脳 103 in the culture medium of the mutant strain was significantly lower than that of the wild strain. Mass spectrometry analysis showed that the protein was a bifunctional autolysin precursor protein (Atl A encoded by Staphylococcus aureus atl A gene. Real-time fluorescence quantitative PCR showed that the transcription level of atl A gene in psm 伪 knockout strain was significantly lower than that in wild strain. Conclusion psm 伪 deletion can decrease the transcriptional expression of atl A gene.
【作者单位】： 第三军医大学基础医学部微生物学教研室;
【基金】：国家自然科学基金(31470241,31570127) 国家级大学生创新创业训练计划(201690031002)~~
【分类号】：R378.11

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