血红素加氧酶-1对原代培养大鼠肺泡Ⅱ型细胞凋亡的影响

发布时间：2019-05-21 23:32

【摘要】：目的：探讨血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1, HO-1)对过氧化氢(hygrogen peroxide, H2O2)氧化损伤的肺泡Ⅱ型上皮细胞(alveolar epithelial typeⅡcell,AEC-Ⅱ)凋亡的影响,研究其对细胞线粒体的作用。 方法：26只健康雄性SD大鼠,均予腹腔麻醉、气管插管、开胸取肺,分离提纯AEC-Ⅱ,将细胞以1×106个／ml接种于培养板,原代培养24 h,将细胞随机分为四组：正常组,H202组,HO-1组,HO-1抑制组(锌原卟啉Ⅸ)。采用H202(0.5mmol/L)损伤AEC-Ⅱ,复制活性氧(Reactive oxygen species, ROS)攻击损伤体内AEC-Ⅱ细胞的情况,建立急性肺损伤(acute lung injury, ALI)细胞模型；用HO-1 (0.2μmol/L)或锌原卟啉Ⅸ(20μmol/L)进行细胞外直接干预。电镜鉴定AEC-Ⅱ,荧光显微镜、流式细胞仪检测细胞凋亡率,流式细胞仪检测线粒体跨膜电位去极化的比例,蛋白印迹法(Western blotting)检测线粒体相关蛋白Bcl-2、p53表达的变化。 结果：电镜下鉴定可见AEC-Ⅱ的特征性结构：细胞表面很多长短不一粗细不等的微绒毛,胞浆内数量不等、大小不一、不同成熟阶段的嗜锇性板层小体(见图1)。荧光显微镜检测：与正常组比较,H202组、HO-1抑制组均可见大量呈绿色、红色荧光的凋亡细胞；HO-1组所见荧光细胞明显减少(见图3)。流式细胞仪检测：与正常组比较,H202组、HO-1抑制组细胞凋亡率增加(P0.05),且随H202作用时间的延长细胞凋亡率增加；线粒体跨膜电位去极化的比例降低(P0.05)。与H202组比较,HO-1组AEC-Ⅱ细胞凋亡率明显降低(P0.05)；线粒体跨膜电位去极化的比例升高(P0.05)。Western blotting法：与正常组比较,HO-1组Bcl-2表达明显增强、p53表达减弱,差异有统计学意义(P0.05)；与HO-1组比较,H202组、HO-1抑制组Bcl-2表达减弱而p53表达明显增强,差异有统计学意义(P＜0.05)。 结论：HO-1降低H202氧化损伤AEC-11细胞凋亡率,其稳定线粒体跨膜电位并调控线粒体相关蛋白Bcl-2、p53的表达可能参与HO-1抗凋亡作用。
[Abstract]:Aim: to investigate the effect of heme oxygenase-1 (heme oxygenase-1, HO-1) on apoptosis of alveolar type 鈪，

本文编号：2482496