糖皮质激素调控DKK1影响骨髓间充质干细胞的增殖与分化

发布时间：2019-05-24 16:07

【摘要】：目的 观察不同浓度糖皮质激素刺激下，骨髓间充质干细胞(Bone mesenchymalstem cells，，BMSCs)中DKK1基因表达的变化，及其对BMSCs增殖及分化能力的影响。 方法 1、取年青患者的骨髓间充质干细胞通过贴壁法进行体外培养及纯化。通过流式细胞技术检测BMSCs表面分子、成骨诱导、成脂诱导及克隆形成实验鉴定BMSCs。 2、分别用含0M、10-8M、10-6M Dex的培养液刺激BMSCs,通过Real-timePCR检测DKK1基因的表达量；并通过克隆形成实验检测其对BMSCs增殖能力的影响。 3、分别用含0M、10-8M、10-6M Dex的成骨及成脂诱导液刺激BMSCs，于3天后提取RNA,通过Real-time PCR检测DKK1基因、成骨基因（Runx2、OCN）及成脂基因（C/EBP、PPARγ）的表达量；并于3周后通过茜素红染色及油红O染色检测其对成骨、成脂分化能力的影响。 结果 1、本实验通过贴壁细胞分离法得到的细胞状态良好，具有强的增殖能力及成骨、成脂分化潜能，表面分子标志CD29、CD90、CD105阳性率较高，CD14、CD34表达阴性率也较高。 2、不同浓度糖皮质激素刺激下，BMSCs的增殖能力与DKK1基因表达量呈负相关。高浓度糖皮质激素刺激下DKK1基因表达最高，而对应的克隆形成能力最低。 3、不同浓度糖皮质激素刺激下，BMSCs的成骨、成脂能力呈相反关系并与DKK1的表达量相关。成骨诱导环境下Dex8组Runx2、OCN的表达最高而DKK1的表达最低，茜素红染色只有Dex8组出现钙化结节。成脂诱导环境下Dex6组C/EBP、PPARγ的表达最高而DKK1表达也最高，油红O染色Dex6组出现大量的脂滴。 结论 1、高浓度糖皮质激素刺激下，DKK1的表达上调,抑制BMSCs的增殖。 2、DKK1对BMSCs的骨向分化具有抑制作用，而对其脂向分化具有促进作用。 3、糖皮质激素导致骨质疏松的原因可能是由于糖皮质激素调控DKK1基因的表达，影响BMSCs的增殖与分化引起的。
[Abstract]:Objective to observe the changes of DKK1 gene expression in bone marrow mesenchymal stem cells (Bone mesenchymalstem cells,BMSCs) stimulated by different concentrations of glucocorticoids and its effect on the proliferation and differentiation of BMSCs. Methods 1. Bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs) from young patients were cultured and purified in vitro by adherent method. Identification of BMSCs surface molecules, osteogenic induction, adipogenic induction and clone formation by flow cytometry 2. The expression of DKK1 gene was detected by Real-timePCR in the culture medium containing 0m, 10 鈮

本文编号：2484995