博尔纳病病毒感染人少突胶质细胞的代谢组学研究

发布时间：2019-05-30 18:50

【摘要】：背景博尔纳病病毒（Borna disease virus，BDV）是单股负链非节段性有包膜的RNA病毒，有高度嗜神经性，BDV感染后在细胞内呈低拷贝复制，呈慢性持续感染状态，使细胞产生非溶解性病变，引起宿主细胞凋亡及细胞功能改变。该病毒宿主广泛，能感染所有的温血动物，引起博尔纳病。近年来大量流行病学研究提示BDV同人神经精神疾病的发生和发展存在着密切的关系。BDV致病机制尚不明确，目前有多种假说，主要包括免疫反应，神经递质，神经可塑性，神经营养因子及信号转导等。对BDV感染后宿主代谢的改变更是知之甚少。PlentikovMV等人的研究显示BDV感染大鼠后会引起去甲肾上腺素、多巴胺、五羟色胺、5-羟基吲哚乙酸和3,4-二羟乙酸等多种代谢产物的变化，可以推测在病毒感染过程中存在着细胞代谢异常，明确这些代谢物的具体变化，对于阐明BDV的慢性持续感染机制有重要意义。目的获得BDV感染OL细胞的广谱代谢物，比较BDV感染与正常OL细胞之间代谢产物的变化，阐明BDV感染的某些生化机制，并阐释造成代谢产物变化的病理生理机制，最终为BDV致病提供证据支持。方法从BDV持续感染细胞中提取BDV病毒液，用所得病毒液重新感染OL细胞，通过RT-PCR,免疫荧光和WB确定感染成功。生长状态良好的OL细胞传代培养至28板后分为2组每组14板，，一组用于BDV病毒感染，另外一组作为对照组。在BDV感染第14天分别提取两组细胞的细胞内代谢产物进行核磁共振（1H nuclear magnetic resonance，1H NMR）检测，数据用偏最小二乘判别分析（PLS-DA）处理。结果从病毒感染细胞中成功提取到了具有感染能力的BDV病毒，并成功地用该病毒重新感染OL细胞。对BDV感染组和对照组组各14例样本进行1H NMR分析，定量化分析了21种代谢产物，结果显示两组样本间存在明显差异，BDV感染组的丙酮酸盐浓聚物水平显著低于对照组（p＝0），谷氨酸、谷氨酰胺和天冬氨酸水平明显高于对照组（p＝0）。结论 1H NMR分析是一种简便实用，成本较低的代谢组学分析方法，适合用于病毒感染致病机制研究。实验结果显示BDV感染主要影响氨基酸代谢、脂类代谢和糖酵解途径。病毒感染后细胞代谢产物中谷氨酸盐显著增加，或许可以解释BDV感染宿主所引起的精神行为症状。
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【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R373.9

【参考文献】