特异递呈PR1抗原肽人工抗原递呈细胞的初步实验研究

发布时间：2019-06-11 17:48

【摘要】：T细胞免疫在肿瘤免疫中发挥重要作用。活化的CD8+T细胞能够分泌细胞因子和细胞毒颗粒,诱导肿瘤细胞凋亡。然而CD8+T淋巴细胞识别肿瘤抗原受人类白细胞抗原Ⅰ类分子(HLA-Ⅰ)的限制。特异性CD8+T淋巴细胞的活化必须首先利用T细胞抗原受体识别抗原递呈细胞或肿瘤细胞表面表达的HLA-Ⅰ类分子递呈的抗原肽,获得活化的第一信号,然后通过共刺激分子受体和配体的结合获得第二信号。肿瘤过继免疫治疗通常采用自体抗原递呈细胞活化T细胞,但自体抗原递呈细胞制备耗时费力,且费用昂贵,限制了其在临床的运用。而人工抗原提呈细胞(artificial antigen presenting cell, aAPC)克服了这些缺点,具有易培养、活化条件易控制、T细胞活化增殖周期短等优点,故近年来对人工抗原提呈细胞的研究日趋活跃。 我们实验室前期已经成功构建了一个单链三聚体(single chain trimer, SCT)重组融合基因,由MHCI分子的基因片段以适当的接头(linker)串联在一起。在本研究中,我们选用的MHC-Ⅰ类分子为HLA-A*0201,抗原表位为PR1(VLQELNVTV)。PR1是人类髓系白血病的肿瘤相关抗原蛋白酶3中的一条HLA-A*0201限制性的、强免疫原性多肽,诱生的PR1特异性细胞毒性T细胞(cytotoxic T lymphocytes, CTLs)具有显著抗髓系白血病作用。 本课题将利用慢病毒载体将该新型的PR1-SCT基因稳定转染至本实验室前期制备的具有多克隆刺激能力的人工抗原递呈细胞(artificial antigen-presenting cells, aAPC)K562/CD86细胞株,使其成为一个既能向抗原特异性CD8+T细胞提供共刺激信号(即第二信号),又能通过MHC分子同时向CD8+细胞提供特异性抗原肽的信号(即第一信号)的人工抗原递呈细胞。 我们首先利用基因工程技术将PR1-SCT重组融合基因克隆至慢病毒载体系统表达质粒中,测序正确后将慢病毒载体系统三质粒共转染293T包装细胞,收获细胞培养上清,得到具有一次感染能力而无复制能力的假型病毒；再用该假型病毒感染前期制备的缺少第一信号分子的K562/CD86细胞,通过抗生素筛选和流式分选技术,分选获得CD86和HLA-A0201高表达的K562/CD86/PR1-HLA-A*0201-SCT(91%),并用Western Blot从蛋白水平进一步验证；接着将分离好的外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cell, PBMCs)与丝裂霉素C处理后的人工抗原递呈细胞K562/CD86/PR1-HLA-A*0201-SCT进行体外混合淋巴细胞培养,多轮刺激后用商品化PRl特异性五聚体检测PR1特异性CTL的频率,验证人工抗原递呈细胞的特异性刺激能力。 本实验研究制备的能提供双信号的人工抗原递呈细胞,建立了一个人工抗原递呈细胞平台,为髓系白血病的过继性免疫治疗奠定了基础。
[Abstract]:T cell immunity plays an important role in tumor immunity. Activated CD8 T cells can secrete cytokines and cytotoxicity particles to induce apoptosis of tumor cells. However, the recognition of tumor antigens by CD8 T lymphocytes is limited by human leukocyte antigen class I molecules (HLA- 鈪，

本文编号：2497365