胎盘源间充质干细胞对同种异体B淋巴细胞免疫调节作用的初步研究

发布时间：2019-07-12 13:31

【摘要】：背景与目的 间充质干细胞[mesenchymal stem cells，MSCs]是干细胞家族的重要成员，具有自我更新和多向分化潜能。胎盘源间充质干细胞（Placenta-derived mesenchymal stemcells, PMSCs）具有来源丰富，无伦理学问题，获取较为方便，且表型与骨髓源MSCs（BMSCs）表达相似，正日渐受人关注。MSCs具有低免疫原性和独特的免疫调节作用，，在自身免疫性疾病及组织修复、器官移植等领域具有广阔的临床应用前景。但其具体的免疫调节作用及机制仍有待澄清。 近年来，BMSCs对于T细胞的免疫调节研究较多，但对B细胞的免疫调节作用仍不明确，不同的研究者观点不一，而在PMSCs对B细胞的免疫调节研究领域更是鲜见报道。本研究在体外分离培养获得PMSCs的基础上，就PMSCs对同种异体B淋巴细胞的增殖、活化及相关细胞表面协同刺激分子表达的影响进行初步研究，探讨PMSCs对B淋巴细胞的免疫调节作用，为进一步临床应用提供实验依据。 方法 从人胎盘组织中分离培养获得形态均一的贴壁细胞，通过检测细胞表面抗原表达、分化潜能等特征进行鉴定，确定所得细胞为间充质干细胞。用CpG2006、重组人CD40L、人IL-2、人IL-4和IgM+IgG(H+G)等(缩写为CpG)激发B细胞，并将其与体外扩增培养的用丝裂霉素处理的PMSCs按5:1的数量共培养，并与PMSCs培养上清组和未激发组等进行对照，具体细胞分组为：（1）未激发组（B）；（2）：CpG等激发组（CpG+B）；（3）：激发B淋巴细胞与PMSCs共培养组（B+CpG+PMSCs）；（4）：激发B淋巴细胞与PMSCs培养上清共培养组（B+CpG+PMSCs(sup)）；（5）：未激发B淋巴细胞与PMSCs共培养组（B+PMSCs）；（6）未激发B淋巴细胞与PMSCs培养上清共培养组（B+PMSCs(sup)）；（7）：对照组（PMSCs）。所有细胞培养72小时后，用免疫荧光标记、流式细胞术检测B细胞增殖及表面正性及负性协同刺激分子CD80、CD86、PD-L1的表达。 结果 1、PMSCs具有MSCs特性的细胞形态和表面标志，表达CD29、CD44、CD105、CD43、CD90、CD106、CD166，不表达CD34、CD45和HLA-DR。 2、PMSCs不表达协同刺激分子CD80、CD86、CD83、PD-1和B7H4，但高表达PD-L1。 3、PMSCs可分化为脂肪细胞，光镜下可见细胞质中脂滴形成，油红0染色阳性；并可分化为成骨细胞，von Kossa法染色可见黑色的钙沉积。 4、CpG2006、重组人CD40L、人IL-2、人IL-4和IgM+IgG(H+G)等激发B细胞24小时后出现活化细胞团， B+CpG+PMSCs组活化细胞团更大，而B+CpG+PMSCs(sup)组活化细胞团较小，未激发组均未出现活化细胞团。 5、标记细胞增殖的核抗原Ki67在B+CpG+PMSCs（41.60±13.81）%组比B+CpG组（19.23±2.79）%表达明显增高，而B+CpG+PMSCs(sup)组（16.00±1.57）%较B+CpG组（19.23±2.79）%表达低，各组间比较有统计学意义。 6、正性协同刺激分子CD86在B+CpG+PMSCs(sup)组（4.21±1.10）%与B+CpG组（3.89±0.43）%间无明显差异。两组CD86的表达都比B+CpG+PMSCs组（10.87±1.86）%低，有统计意义。 7、正性协同刺激分子CD80在未激发组的表达较低，为(17.33±9.60)%，在B+CpG组为（51.17±6.53）%、B+CpG+PMSCs组为（49.37±19.45）%和B+CpG+PMSCs(sup)组为（54.74±13.59）%，其表达均高于未激发组，但三者之间无明显统计学差别 8、负性协同刺激分子PD-L1在未激发组B淋巴细胞的表达为（3.24±0.25）%，B+CpG组（37.80±3.30）%，B+CpG+PMSCs组（37.85%±6.65），B+CpG+PMSCs(sup)组（32.65±5.65）%，刺激物激活的三组PD-L1的表达均较高，但三者之间无明显统计学差异。 结论 1、胎盘组织间充质干细胞来源丰富，PMSCs具有与BMSCs相似的免疫表型、多向分化能力。 2、PMSCs在一定情况下，能促进B淋巴细胞的活化和增殖，这种促进作用可能与细胞间的直接接触有关。 3、PMSCs促进活化B淋巴细胞增殖的机制可能与表面协同刺激分子CD86有关，可能并不通过协同刺激分子PD-L1和CD80信号途径介导。
文内图片：
图片说明： 细胞生长变快，约一周可再次传代。PMSCs可以在体外稳定传代，且10代以后其增殖速度无明显减慢。图1 胎盘间充质干细胞（PMSCs）的形态及生长情况，倒置显微镜观察并拍照。（A）：PMSCs原代培养7d（40X）；（B）：PMSCs第1代培养2d（40X）；PMSCs第3代培养6d（40X）；（D）：PMSCs第3代培养6d（100X）。
文内图片：
图片说明： PMSCs 表面协同刺激分子的表达情况。PMSCs 不表达协同刺激分子 CD80、CD86、CD83、PD-1 和 B7H4，但高表达 PD-L1（图 2B）。图2A 流式细胞术检测PMSCs细胞表面抗原的表达图2B 流式细胞术检测PMSCs细胞表面协同刺激分子的表达
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R329

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本文编号：2513737