诱导骨髓间充质干细胞向气管软骨细胞分化的研究

发布时间：2019-08-01 06:31

【摘要】：目的:探讨骨髓间充质干细胞的分离、提取和体外扩增的最佳条件,然后体外诱导骨髓间充质干细胞(BMSCs)向软骨细胞定向分化,并对分化后细胞进行鉴定,为气管软骨组织工程提供实验依据。 方法:采用全骨髓贴壁培养法分离、培养骨髓间充质干细胞(BMSCs),然后将培养的细胞在TGF-β1、地塞米松(Dex)、胰岛素及维生素C(Vit C)等诱导下进行分化。在光镜下观察诱导细胞形态学的改变,然后用苏木精-伊红(HE)染色、甲苯胺蓝染色等方法检测诱导细胞的分泌功能,并采用RT-PCR方法检测诱导后细胞中II型胶原(Col II)的表达。 结果:体外培养的原代骨髓间充质干细胞(BMSCs)48小时内可见有少量贴壁细胞,7天后贴壁细胞明显增多,呈梭形栅栏样或多边形分布,9天后可见呈集落生长的细胞。BMSCs在转化生长因子(TGF-β1)、地塞米松(Dex)、胰岛素及维生素C(Vit C)等作用下,7天后可见少量细胞由梭形变为不规则或椭圆形,随后聚集形成软骨样结节。HE染色显示,诱导后细胞呈软骨细胞样形态;甲苯胺蓝染色的结果示细胞外基质异染,呈蓝色。而RT-PCR的结果显示,诱导分化后的BMSCs可表达Col II的mRNA。 结论:采用全骨髓贴壁法可稳定获得纯度较高的骨髓间充质干细胞(BMSCs),并在转化生长因子(TGF-β1)、地塞米松(Dex)、胰岛素及维生素C(Vit C)等作用下可被诱导分化为软骨样细胞。
【图文】：

BMSCs经诱导后，可见细胞体积增大，逐渐变为多角形、多边形

图 8 图中 M 代表的是 Marker、A 代表的是经过诱导后的细胞，可以看到在 500-800bp 之间有一条明显条带，，与预期 510bp 的结果相符
【学位授予单位】：桂林医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R329

【参考文献】

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本文编号：2521580