载脂蛋白M-1-磷酸鞘氨醇轴在巨噬细胞炎症中的作用

发布时间：2017-03-16 20:06

  本文关键词：载脂蛋白M-1-磷酸鞘氨醇轴在巨噬细胞炎症中的作用，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:明确载脂蛋白M(apolipoprotein M,apoM)在外周血细胞表面的表达情况,探讨apoM在炎症中的作用及可能机制。方法:采集健康成年志愿者新鲜全血,经淋巴细胞分离液分离后,CD3、CD19、CD14、CD56和CD16抗体分别标记T细胞、B细胞、单核细胞、NK细胞,用藻红蛋白(P-phycoerythrin,PE)标记apoM,流式细胞仪及激光共聚焦分别检测不同细胞亚群上apoM蛋白的表达情况。以人单核细胞THP-1细胞为研究对象,体外构建巨噬细胞炎症模型。实验分组:(1)对照组;(2)10μg/ml人重组apoM蛋白单独预处理3h;(3)10μg/ml人重组apoM蛋白预处理细胞3h,10ng/ml脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)孵育6h;(4)10ng/ml LPS孵育6h。双重荧光定量PCR法(dual fluorescent quantitative real-time PCR)检测肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白介素1β(Interleukin 1 beta,IL-1β)的mRNA水平。用1-磷酸鞘氨醇受体2(Sphingosine 1 Phosphatereceptor 2,S1P2)拮抗剂JTE-013(30μM)、激动剂CYM-5520(1μM、10μM、50μM)和S1P1、S1P3、S1P4、S1P5激动剂FTY720(10μM)分别预处理巨噬细胞0.5h,再用人重组apo M蛋白孵育9h,采用双重荧光定量PCR法检测TNF-α和IL-1β的mRNA水平。结果:激光共聚焦结果显示,T细胞、B细胞、NK细胞和单核细胞表面均表达apoM蛋白。流式细胞检测结果显示,apoM在CD14+单核细胞上表达的比例最高,达到14.4%,其次为CD3+T细胞,表达比例为7.4%,CD19+B细胞、CD56+NK细胞和CD16+NK细胞表达apoM的比例分别为6.2%、2.4%和4.2%。LPS刺激巨噬细胞可显著上调TNF-α和IL-1β的mRNA表达水平,人重组apoM蛋白和LPS共同处理组TNF-α和IL-1β的m RNA表达水平与LPS单独刺激组相比分别升高1.15和1.21倍(P值分别为0.0383和0.0034)。在体外,apoM重组蛋白单独作用可显著上调巨噬细胞中TNF-α和IL-1β的mRNA的表达(分别升高2.09倍和1.35倍,P值为0.0007和0.0026)。JTE-013和apoM重组蛋白共同处理组与单独apoM重组蛋白处理组相比,TNF-α和IL-1β的mRNA水平升高1.86和1.65倍(P值均小于0.0001),CYM-5520和apoM重组蛋白共同处理组与apoM单独处理组相比,TNF-α和IL-1β的表达显著降低(分别降低1.41和1.24倍,P值为0.0406和0.0275)。双因素方差分析显示apoM和JTE-013对巨噬细胞TNF-α、IL-1βmRNA表达水平的交互作用有统计学意义(P0.01)。FTY720和apoM重组蛋白共同作用也能显著抑制巨噬细胞TNF-α、IL-1βmRNA表达(分别降低1.48和1.6倍,P值均小于0.0001),但双因素方差分析显示apoM和FTY720对巨噬细胞TNF-α、IL-1βmRNA表达水平的交互作用没有统计学意义(P0.05)。结论:健康人外周血单个核细胞中,T细胞、B细胞、NK细胞和单核细胞都表达apoM蛋白,单核细胞表达量最高。人重组apoM蛋白能够促进LPS介导的巨噬细胞TNF-α和IL-1βmRNA水平的表达。JTE-013能够影响人重组apoM的促炎作用,人重组apoM蛋白可能通过S1P2受体途径发挥其促炎作用。
【关键词】：apoM S1P受体 巨噬细胞 炎症因子
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R364.5
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 第一部分 健康人外周血单个核细胞上apoM蛋白的表达9-17
• 一、前言9-10
• 二、材料与方法10-12
• 三、结果12-15
• 四、讨论15-17
• 第二部分 S1P2受体降低人重组apoM引起的巨噬细胞炎症因子的表达17-32
• 一、前言17-18
• 二、材料与方法18-23
• 三、结果23-27
• 四、讨论27-32
• 结论32-33
• 参考文献33-38
• 综述38-49
• 参考文献45-49
• 英文缩略词表49-51
• 攻读学位期间发表学术论文51-52
• 致谢52-53

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本文编号：252266