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PEN载ODN MT01复合物性能检测及其对成骨细胞增殖的影响

发布时间:2017-03-16 21:04

  本文关键词:PEN载ODN MT01复合物性能检测及其对成骨细胞增殖的影响,由笔耕文化传播整理发布。


【摘要】:ODN MT01是模拟人线粒体核苷酸序列自主设计含有27个碱基的单链DNA序列[一种具有免疫抑制功能的寡核苷酸,国家发明专利,专利号:CN101643496]。实验研究表明,ODN MT01在大鼠牙周炎所导致的牙槽骨吸收中其可起到阻止作用,并且可以促进大鼠的成骨细胞成熟活化;此外可以调控细胞内Runx-2、Collagen-I和SP7等成骨相关因子的表达水平,同时可以促进骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化。以上研究提示,ODN MT01有可能对骨重塑具有调控作用。 ODN MT01作为一种寡核苷酸,受半衰期短和细胞内DNA酶降解作用的影响,导致细胞有效摄取率无法达到阈值水平,影响其发挥作用;此外,由于未甲基化ODN MT01表面带负电荷,这一特点使其与同带负电荷的细胞膜结合难度明显增加。针对以上问题,为提高其稳定性,目前常对ODN进行硫代磷酸化修饰。但由于修饰后仍未能改变负电荷电性不能提高细胞摄取率。因此,研究学者致力于呈递系统的设计及使用,目前研究主要包括阳离子脂质体、阳离子高分子聚合物、阳离子多肽类、阳离子聚合物、微球和纳米粒子等。PEI已经成为非病毒基因类载体中发展最快及应用最广的一类传输载体。本研究拟用阳离子聚合物PEI的衍生物PEN作为ODN MT01的传递载体,探讨PEN装载ODN MT01的最佳质量比以及能否高效率呈递ODN MT01到MG63细胞促进其增殖,为后续研究奠定实验基础。 目的:检测PEI衍生物PEN装载ODN MT01复合物性能及PEN/ODN MT01复合物转染MG63细胞对细胞增殖影响。 方法:通过Micheal加成反应,利用N-异丙基丙烯酰胺对25K的PEI的氨基进行修饰,得到样品PEN;运用Nanodrop检测技术,确定载体PEN与ODN MT01的最佳配比比例范围;通过琼脂糖凝胶电泳对复合物进行定性检测;利用1H NMR技术、纳米粒度电位测定技术完成PEN结构和表面电荷性质及与非硫代磷酸化ODN MT01形成复合物粒径的检测;以PEN介导ODN MT01转染大鼠骨髓基质细胞和人源性成骨样细胞系MG63,激光共聚焦显微镜观察胞吞复合物,确定最佳装载比例,采用流式细胞技术检测复合物与单体对细胞周期影响的差异。 结果:PEN与ODN MT01质量比为6:1时,,装载率高达77.67%,且转染MG63细胞荧光强度最大;PEN/ODN MT01复合物随质量比增加表面由负电转为正电,粒径大小90-110nm;PEN/ODN MT01复合物与对照组相比明显促进MG63细胞增殖。 结论:PEN装载ODN MT01后能可以改变复合物表面电性,利于细胞摄取;PEN装载ODN MT01后粒径大小适合细胞摄取;PEN装载ODN MT01质量比为1:6时,可以高效转运ODN MT01到MG63细胞,同时可以明显促进MG63细胞增殖。
【关键词】:寡核苷酸MT01 PEI衍生物 人骨肉瘤成骨细胞系 质量比
【学位授予单位】:吉林大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2015
【分类号】:R329.2
【目录】:
  • 中文摘要4-6
  • Abstract6-11
  • 英文缩略词11-12
  • 第1章 绪论12-22
  • 1.1 研究意义12-13
  • 1.2 文献综述13-18
  • 1.2.1 ODN MT0113-14
  • 1.2.2 ODN MT01 与骨重塑14
  • 1.2.3 ODN 与递呈系统14-18
  • 1.3 研究现状18-20
  • 1.3.1 ODN 与骨改建研究进展18-19
  • 1.3.2 ODN 与传输载体19-20
  • 1.4 研究思路20-22
  • 第2章 材料与方法22-24
  • 2.1 材料22
  • 2.2 方法22-24
  • 2.2.1 PEN 合成及其装载 ODN MT01 效率测定22-23
  • 2.2.2 PEN/ODN MT01 复合物电位及粒径测量23
  • 2.2.3 PEN/ODN MT01 复合物对 MG63 细胞增殖检测23
  • 2.2.4 ODN MT01 与 PEN 按不同质量比装载转染 MG63 细胞测定23-24
  • 第3章 结果24-28
  • 3.1 ODN MT01 与 PEN 按不同质量比的装载情况24-25
  • 3.2 PEN/ODN MT01 复合物表面电位和粒径25
  • 3.3 ODN MT01 与 PEN 形成复合物促进 MG63 细胞增殖25-26
  • 3.4 ODN MT01 与 PEN 按不同质量比装载转染 MG63 细胞26-28
  • 第4章 讨论28-32
  • 4.1 PEN 装载 ODN MT01 效率29
  • 4.2 PEN/ODN MT01 复合物表面电性29
  • 4.3 PEN/ODN MT01 复合物粒径29-30
  • 4.4 PEN/ODN MT01 复合物促进细胞增殖30-31
  • 4.5 展望31-32
  • 第5章 结论32-33
  • 参考文献33-38
  • 作者简介及在校期间所取得的科研成果38-39
  • 致谢39

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 ;Transient Expression of Exogenous Gene into Plant Cell Mediated by PEI Nanovector[J];Agricultural Sciences in China;2011年06期

2 姚祺;金雪;胡天楠;王启闻;王训师;胡奇达;徐桑;周峻;汤谷平;;四种聚阳离子载体材料的体外细胞学及体内性质研究[J];浙江大学学报(医学版);2012年06期


  本文关键词:PEN载ODN MT01复合物性能检测及其对成骨细胞增殖的影响,由笔耕文化传播整理发布。



本文编号:252321

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