大鼠雪旺细胞系RSC96条件培养液对少突胶质前体细胞的体外增殖作用

发布时间：2019-08-24 07:16

【摘要】：目的观察大鼠雪旺细胞系RSC96细胞条件培养液(RSC96-CM)对少突胶质前体细胞(OPCs)增殖的影响,探讨其作用机制。方法应用免疫粘附法从胚胎15d的SD大鼠脊髓分离OPCs,应用Brd U掺入实验检测OPCs的增殖,应用RT-PCR技术检测PDGF-AA和bFGF在RSC96细胞的表达,应用ELISA技术检测RSC96-CM中PDGF-AA和bFGF蛋白的浓度,以特异性抑制剂阻断观察PDGF-AA和bFGF在RSC96-CM诱导OPCs增殖中的作用,以特异性抑制剂观察ERK和JNK信号途径在RSC96-CM诱导OPCs增殖中的作用。结果不同浓度的RSC96-CM培养的OPCs,其BrdU+细胞的比例与对照组相比均显著增加(P0.05),其中,在含50%RSC96-CM的培养液中培养的OPCs的BrdU+细胞的比例达高峰。RT-PCR证实RSC96细胞显著表达PDGF-AA和bFGF的mRNAs,ELISA结果发现,RSC96-CM中PDGF-AA和bFGF的蛋白浓度分别是我们前期报道的B104CM中PDGF-AA和bFGF的蛋白水平的0.87倍和0.92倍。PDGFR的特异性抑制剂AG1295和bFGFR特异性抑制剂PD173074均显著降低RSC96-CM诱导的OPCs增殖;此外,Erk1/2特异性抑制剂U0126和JNK特异性抑制SP600125的预孵也显著降低RSC96-CM诱导的BrdU+OPCs的比例(P0.01)。结论 RSC96-CM显著诱导OPCs的增殖,其通过RSC96分泌的PDGF-AA和bFGF激活Erk1/2和JNK信号途径而发挥作用;RSC96-CM也可以作为OPCs常规培养的扩增剂。
【图文】：

牡鞍着ǘ确直鸫?到20.42±3.88ng/mL和11.94±2.85ng/mL，分别是我们前期报道的B104CM中PDGF-AA和bFGF的蛋白水平的0.87倍和0.92倍（图3B）。2.4PDGF-AA和bFGF是介导RSC96-CM诱导的OPCs增殖的关键因子为鉴定是否PDGF-AA和bFGF是介导RSC96-CM诱导的OPCs增殖的关键因子，我们观察了PDGFR信号的特异性抑制剂AG1295和bFGFR特异性抑制剂PD173074能否阻断或降低RSC96-CM诱导的OPCs增殖。结果表明，AG1295和PD173074均显著降低RSC96-CM诱导的OPCs增殖，，BrdU+细胞的比例从89.05±5.76%（图4B）分别减低到40.59±4.29%（图图1OPCs的形态学和免疫细胞化学鉴定Fig.1MorphologicalandimmunocytochemicalcharacteristicsofOPCs.A:Phase-contrastphotomicrographofOPCsculturedingrowthmedium;B:CellsthatwereimmunopositiveforA2B5(green);C：CellsthatwereimmunopositiveforNG2(Red);D:WhenculturedinFBS-freedifferentiationmediumfor5days,OPCsdifferentiatedintoRip-positiveoligodendrocytes(green);E:Whenculturedindifferentiationmediumcontaining10%FBSfor5days,OPCsdifferentiatedintoGFAP-positivetypeIIastrocytes(green);CellsinB-EwerecounterstainedwithHoechst33342(blue).Scalebar=25μm.A2B5RipGFAPABCNG2DE10%RSC96-CM30%RSC96-CM50%RSC96-CM100%RSC96-CMCtrl1009080706050403020100%(A2B5+BrdU+)/A2B5+celsCtrl100%RSC96-CM30%RSC96-CM50%RSC96-CM10%RSC96-CMA2B5/BrdU*********图2RSC96-CM诱导OPCs的增殖Fig.2RSC96-CMpromotestheproliferationofculturedOPCsinvitro.A-E:Brdu-positiveOPCswh

RSC96-CM诱导OPCs的增殖Fig.2RSC96-CMpromotestheproliferationofculturedOPCsinvitro.A-E:Brdu-positiveOPCswhenthecellswereculturedfor3daysincontrol(A),10%(B),30%(C),50%(D)and100%(E)
【作者单位】： 蚌埠医学院组织学与胚胎学教研室;蚌埠医学院组织移植安徽省重点实验室;蚌埠医学院第一附属医院检验科;
【基金】：国家自然科学基金(81471277) 安徽省高等学校自然科学研究重点项目(KJ2016A869,KJ2017A232) 安徽省高等学校自然科学研究一般项目(KJ2015B049by)~~
【分类号】：R329.2

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本文编号：2528782