多巴胺受体在大鼠结肠黏膜下神经丛的表达和细胞分布

发布时间：2019-08-26 11:09

【摘要】：目的多巴胺(dopamine,DA)与其受体结合调节肠道动力、黏膜分泌及屏障等,黏膜下神经元参与DA对黏膜的生理调节,但其受体的具体分布尚不明了。通过检测DA受体在大鼠结肠黏膜下层的蛋白和mRNA表达及细胞分布,为DA调节大鼠结肠病理生理机制提供依据。方法用RT-PCR和Western blotting方法定性测定DA受体在大鼠结肠黏膜下层的mRNA和蛋白的表达;免疫荧光双染色后在激光共聚焦显微镜下观察DA受体在黏膜下血管活性肠肽(vasoactive intestinal peptide,VIP)能和胆碱能神经元上的分布。结果在大鼠结肠黏膜下层,DA受体D_1、D_2、D_5的mRNA及蛋白均有表达;在黏膜下神经丛VIP能阳性的神经元中有大量分布,其中D_1阳性的神经元占58.94%±2.245%,D_2阳性神经元占52.03%±9.384%,D_5阳性神经元占86.21%±2.902%,且D_5阳性神经元数量显著高于D_1和D_2;在黏膜下神经丛胆碱能阳性的神经元广泛表达DA受体,其中D_1阳性神经元占87.75%±7.307%,D_2阳性神经元占88.50%±8.761%,D_5阳性神经元占89.25%±10.75%。结论 DA受体在大鼠结肠黏膜下层有D_1、D_2及D_5的表达,且在VIP能及胆碱能神经元上均有分布,其中D_5受体在VIP能神经元上的分布显著高于D_1及D_2受体。本研究可为深入探讨DA调节结肠黏膜生理及病理机制提供形态学依据。
【图文】：

首都医科大学学报第38卷1.5统计学方法应用GraphPadPrism5.0软件进行统计处理，数据统计描述以均数±标准误(x±SE)表示，结果来自4只大鼠。采用“One-wayANOVA”方法分析。以P＜0.05为差异有统计学意义。2结果2.1多巴胺受体在大鼠结肠的mＲNA及蛋白表达用PCＲ技术检测了DA受体在大鼠结肠的mＲ-NA，如图1A显示:DA受体D1、D2、D5的mＲNA有明显表达，但未检测到DA受体D3及D4的表达。进一步用Westernblotting方法检测了相应蛋白的表达，结果如图1B所示:D1在120000处、D2在55000处、D5在100000和50000处均有明显且特异的条带，提示DA受体在大鼠结肠黏膜下组织中有D1、D2及D5的表达。2.2多巴胺受体在大鼠结肠胆碱能神经元上的分布ChAT是ACh的合成酶，在神经元内合成，可作为胆碱能神经元的标志。因此在本研究中，以ChAT为胆碱能神经元标记进行免疫荧光染色，在激光共聚焦显微镜下分别观察ChAT免疫阳性神经元在黏膜下神经丛的分布及DA受体D1、D2、D5在大鼠远端结肠黏膜下神经丛内ChAT免疫反应阳性神经元上的表达情况，并进行统计。结果如图2所示，黏膜下分布有图1多巴胺受体mＲNA及蛋白在大鼠结肠黏膜下层的表达Fig.1mＲNAandproteinexpressionofDAreceptorsinratcolonicsubmucosaA:mＲNAexpressionofDAreceptorsinratcolonicsubmucosa;n=4;B:proteinexpressionofDAreceptorsinratcolonicsubmucosa;n=4;DA:dopa-mine;DAＲ:dopaminereceptors．图2多巴胺受体在大鼠结肠黏膜下胆碱能神经元上的表达及共存率比较Fig.2ThedistributionofdopaminereceptorsonChAT-IＲneuronsinsubmucosalplexusofratcolon，andcomparisonoftheirco-existenceA:greenfluorescencestainingfordopamine

在120000处、D2在55000处、D5在100000和50000处均有明显且特异的条带，提示DA受体在大鼠结肠黏膜下组织中有D1、D2及D5的表达。2.2多巴胺受体在大鼠结肠胆碱能神经元上的分布ChAT是ACh的合成酶，在神经元内合成，可作为胆碱能神经元的标志。因此在本研究中，，以ChAT为胆碱能神经元标记进行免疫荧光染色，在激光共聚焦显微镜下分别观察ChAT免疫阳性神经元在黏膜下神经丛的分布及DA受体D1、D2、D5在大鼠远端结肠黏膜下神经丛内ChAT免疫反应阳性神经元上的表达情况，并进行统计。结果如图2所示，黏膜下分布有图1多巴胺受体mＲNA及蛋白在大鼠结肠黏膜下层的表达Fig.1mＲNAandproteinexpressionofDAreceptorsinratcolonicsubmucosaA:mＲNAexpressionofDAreceptorsinratcolonicsubmucosa;n=4;B:proteinexpressionofDAreceptorsinratcolonicsubmucosa;n=4;DA:dopa-mine;DAＲ:dopaminereceptors．图2多巴胺受体在大鼠结肠黏膜下胆碱能神经元上的表达及共存率比较Fig.2ThedistributionofdopaminereceptorsonChAT-IＲneuronsinsubmucosalplexusofratcolon，andcomparisonoftheirco-existenceA:greenfluorescencestainingfordopaminereceptorsimmunoreactivity，redfluorescencestainingforChATimmunoreactivity;B:co-expressionrateofD1，D2orD5inChAT-IＲneurons，n=4;ChAT-IＲ:cholineacetyltransferaseimmunoreactivity;DAＲ:dopaminereceptors．414
【作者单位】： 首都医科大学基础医学院免疫学系;首都医科大学基础医学院生理学与病理生理学系;
【基金】：国家自然科学基金(31300954,81370482)~~
【分类号】：R363


本文编号：2529249