骨形态发生蛋白-4对大鼠肝源性肝干细胞增殖与分化的影响

发布时间：2019-09-02 19:13

【摘要】：目的：探讨骨形态发生蛋白-4对大鼠原位肝干细胞,即肝卵圆细胞HOC的增殖及分化的影响。方法：采用重组因子BMP4及重组腺病毒BMP4作用于大鼠HOC,以BMP-4拮抗剂重组因子Noggin及重组腺病毒BMP4-shRNA阻断BMP-4的作用以便实验对照,另外还设有空腺病毒组及未处理组作为试验对照。在实验不同时间点,通过四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测BMP-4对HOC增殖的影响,透射电镜下观察细胞的超微结构特征,RT-PCR检测各试验组中不同HOC可能分化后细胞表型特异性分子标志物的mRNA表达情况,以过碘酸雪夫反应(PAS)检测细胞的糖原的合成与储积情况,并通过吲哚氰绿(ICG)摄取排泌试验检测细胞的代谢功能。结果：细胞增殖实验显示,在不同作用时间点,BMP-4干预组的细胞吸光值均高于抑制剂处理组和空白对照组。透射电镜下可观察到BMP-4干预后的HOC具有分化良好的上皮细胞的超微结构特征。RT-PCR显示BMP-4诱导HOC分化后,肝细胞特异性分子标志物的mRNA得到显著表达。PAS与ICG检测显示经BMP-4诱导分化的HOC具备正常肝细胞的糖原合成与吲哚氰绿摄取及代谢功能。结论：BMP-4可促进大鼠肝干细胞HOC的增殖,并诱导其向肝细胞表型定向分化,且经BMP-4诱导分化的HOC具备正常肝细胞的糖原合成与吲哚氰绿摄取及代谢功能。
【图文】：

独立样本,细胞增殖,统计分析,数据

部分:肝卵圆细

腺病毒,病毒组

用透射电镜观察其超微结构，图2显示:图(b)重组因子BMP4组、图(e)B人4P4腺病毒组干预诱导后的细胞胞浆极为丰富，核浆比例较小，，胞浆中可见大量的线粒体、溶酶体、高尔基体、内质网、糖原颗粒以及囊泡结构;细胞表面可见微绒毛;相邻细胞间连接形成好，连接复合体形成，可见紧密连接与缝隙连接;这些均是分化良好的上皮细胞的超微结构特征，表明该细胞向上皮细胞分化的趋势。而图(a)阴性对照组、图(c)未干预组、图(d)空腺病毒组、图(f)BMP4一shRNA腺病毒组则胞浆不丰富，细胞器相对少，胞核比例相对大，细胞间连接形成差，表明细胞分化程度低。通过对比研究，充分表明BMP一4可诱导肝卵圆细胞向上皮细胞分化。
【学位授予单位】：中南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R329

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