基于斑马鱼模型研究补骨脂肝损伤效应及作用机制

发布时间：2019-09-09 18:01

【摘要】：目的采用斑马鱼模型探究补骨脂提取物对肝脏的毒性作用。方法根据斑马鱼幼鱼在不同浓度的补骨脂水提物和醇提物中的存活数和死亡数,计算出幼鱼死亡率初步评估补骨脂水提物和醇提物的毒性大小。药浴后的斑马鱼幼鱼进行组织匀浆,通过生化仪测定谷丙转氨酶(ALT),谷草转氨酶(AST)和乳酸脱氢酶(LDH)的酶活。斑马鱼成鱼给药24h后冰浴处死,进行HE染色观察肝脏病理变化。采用qPCR和Western Blot法检测成鱼肝脏中固醇调节元件结合蛋白-1c(SREBP-1c),脂肪酸合成酶(FAS),乙酰辅酶A羧化酶(ACC1)以及微粒体甘油三脂转移蛋白(MTP)的mRNA表达和蛋白表达。结果与正常组相比,补骨脂药浴组的斑马鱼幼鱼在2dpf时出现死亡。并且补骨脂对幼鱼的毒性具有一定的浓度依赖性。相同浓度下,醇提`物的毒性大于水提物。HE染色结果可观察到补骨脂醇提和水提给药组的成鱼中肝脏发生脂变,同时给药组的斑马鱼幼鱼匀浆组织液中ALT,AST和LDH含量明显高于空白组。通过qPCR实验发现,补骨脂水提物和醇提物给药组的斑马鱼肝脏中SREBP-1c,FAS,ACC1的表达升高,MTP的表达降低。Western Blot检测结果与qPCR结果一致。结论浓度为300μg/mL和600μg/mL的补骨脂水提物和浓度为40μg/mL和80μg/mL的补骨脂醇提物药浴给药48h会导致斑马鱼的肝脏产生病变,甚至死亡,且机制可能与肝脂变有关。
【图文】：

斑马鱼,补骨脂,水提液,死亡率

量和内参照ＧＡＰＤＨ的比值作为相对表达量。３结果３．１水提液和醇提液对斑马鱼幼鱼死亡率的影响结果表明，斑马鱼的死亡率与补骨脂的给药浓度存在一定的关系。结果发现不管是水提物还是醇提物，随着给药浓度的提高，斑马鱼幼鱼的死亡率呈现上升趋势。４０μｇ／ｍＬ的醇提物和２００μｇ／ｍＬ的水提物对斑马鱼幼鱼的影响较小，８０μｇ／ｍＬ的醇提物和６００μｇ／ｍＬ的水提物培养的斑马鱼幼鱼在４ｄｐｆ时发生明显的死亡。不同天数的斑马鱼幼鱼死亡率如图１所示。图１不同浓度补骨脂醇提液（ａ）和水提液（ｂ）对斑马鱼死亡率的影响３．２水提液和醇提液对斑马鱼幼鱼生化指标的影响水提物和醇提物给药后，斑马鱼幼鱼体内ＡＬＴ、ＡＳＴ和ＬＤＨ含量与对照组相比显著升高（Ｐ＜０．０５），如表２所示。ＡＬＴ和ＡＳＴ主要分布在肝细胞内。当肝细胞受到损伤时，肝细胞的完整性被破坏，转氨酶没释放入血。从而引起血浆内转氨酶的浓度升高，因此转氨酶的升高是肝细胞受损伤的一个特征。ＬＤＨ是体内能量代谢过程中一个比较重要的酶，当肝细胞受到损伤时，细胞膜受到损害，ＬＤＨ的漏出率就会升高［６－７］。—２６５吴豪，等：基于斑马鱼模型研究补骨脂肝损伤效应及作用机制初探—第３期

斑马鱼,补骨脂,水提液,死亡率

量和内参照ＧＡＰＤＨ的比值作为相对表达量。３结果３．１水提液和醇提液对斑马鱼幼鱼死亡率的影响结果表明，斑马鱼的死亡率与补骨脂的给药浓度存在一定的关系。结果发现不管是水提物还是醇提物，随着给药浓度的提高，斑马鱼幼鱼的死亡率呈现上升趋势。４０μｇ／ｍＬ的醇提物和２００μｇ／ｍＬ的水提物对斑马鱼幼鱼的影响较小，８０μｇ／ｍＬ的醇提物和６００μｇ／ｍＬ的水提物培养的斑马鱼幼鱼在４ｄｐｆ时发生明显的死亡。不同天数的斑马鱼幼鱼死亡率如图１所示。图１不同浓度补骨脂醇提液（ａ）和水提液（ｂ）对斑马鱼死亡率的影响３．２水提液和醇提液对斑马鱼幼鱼生化指标的影响水提物和醇提物给药后，斑马鱼幼鱼体内ＡＬＴ、ＡＳＴ和ＬＤＨ含量与对照组相比显著升高（Ｐ＜０．０５），如表２所示。ＡＬＴ和ＡＳＴ主要分布在肝细胞内。当肝细胞受到损伤时，肝细胞的完整性被破坏，转氨酶没释放入血。从而引起血浆内转氨酶的浓度升高，因此转氨酶的升高是肝细胞受损伤的一个特征。ＬＤＨ是体内能量代谢过程中一个比较重要的酶，当肝细胞受到损伤时，细胞膜受到损害，ＬＤＨ的漏出率就会升高［６－７］。—２６５吴豪，，等：基于斑马鱼模型研究补骨脂肝损伤效应及作用机制初探—第３期
【作者单位】：安徽中医药大学药学院;江苏省中医药研究院国家中医药管理局中药释药系统重点研究室;
【基金】：国家中医药管理局公益性行业科研专项(201507004-10)
【分类号】：R285.5;R-332

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