Notch信号通路在肺成纤维细胞表型转化中的作用及机制研究
发布时间：2019-09-28 11:17
【摘要】：目的：探讨γ-分泌酶抑制剂DAPT抑制Notch信号前后，在肺成纤维细胞中Notch信号通路受体Notch1、配体Jagged1及肌成纤维细胞标志因子α-SMA表达的变化,研究Notch信号通路在肺成纤维细胞向肌成纤维细胞转化中的作用。 方法：采用胰酶消化法，从新出生2-3天的S-D大鼠肺组织中分离培养肺成纤维细胞，波形蛋白（Vimentin）免疫细胞化学法鉴定培养至第三代的成纤维细胞的纯度，无血清培养基同步24h，再将细胞分为对照组、TGF-β1组、TGF-β1+DAPT组；TGF-β1组及TGF-β1+DAPT组加入5ng/ml的TGF-β1诱导成纤维细胞转化为肌成纤维细胞，TGF-β1+DAPT组同时加入500nmol/l的DAPT抑制Notch信号的表达；分别采用免疫细胞化学法检测α-SMA蛋白的表达变化，RT-PCR法检测Notch1、Jagged1和α-SMA mRNA的表达变化，Western-blot法检测Notch1、Jagged1和α-SMA蛋白的表达变化；采用SPSS18.0统计软件进行统计学分析，两样本均数的比较采用t检验，多个样本均数比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验。 结果：（1）Vimentin免疫细胞化学：几乎100%细胞胞浆内可见棕褐色颗粒及条纹，证明胰酶消化法培养至第三代的几乎全为成纤维细胞；（2）α-SMA免疫细胞化学：未加药物干预的对照组细胞中少部分细胞内有淡黄色颗粒及条纹，TGF-β1组大部分细胞内有黄色和黄褐色颗粒及条纹，TGF-β1+DAPT组部分细胞内有淡黄色颗粒及条纹；（3）α-SMAmRNA和蛋白表达：TGF-β1组α-SMA的mRNA和蛋白的相对吸光度值（0.8510.027和0.7850.020）较对照组（0.3950.018和0.3910.022）和TGF-β1+DAPT组（0.3540.029和0.3970.016）显著升高，但对照组与TGF-β1+DAPT组比较则差异无统计学意义（P0.05）；（4）Notch1mRNA和蛋白表达：TGF-β1组Notch1mRNA和蛋白相对吸光度值分别为0.783±0.018和0.701±0.026，较对照组（0.278±0.022和0.312±0.019）和TGF-β1+DAPT组（0.313±0.029和0.345±0.022）明显升高，而对照组和TGF-β1+DAPT组相比较则差异无统计学意义（P0.05）；（5）Jagged1mRNA和蛋白表达：TGF-β1组Jagged1mRNA和蛋白相对吸光度值（0.851±0.028和0.847±0.026）较对照组（0.392±0.021和0.394±0.027）和TGF-β1+DAPT组（0.404±0.024和0.409±0.026）升高显著，对照组和TGF-β1+DAPT组相比较则差异无统计学意义（P0.05） 结论：TGF-β1可以诱导肺成纤维细胞转化为肌成纤维细胞，转化过程中Notch1、Jagged1和α-SMA mRNA及蛋白均表达升高，DAPT抑制Notch信号后，可以阻止肺成纤维细胞向肌成纤维细胞的转化，，下调Notch1、Jagged1和α-SMAmRNA及蛋白的表达，进而抑制肺纤维化。
【图文】：
第 3 章 结果3.1 Vimentin 免疫细胞化学培养至第三代的大鼠肺成纤维细胞，可见均为长梭形细胞，细胞大小均一。Vimentin 染色后几乎所有细胞浆内均可见棕褐色颗粒及条纹，即全为 Vimentin阳性细胞，证明胰酶消化法培养的细胞传至第三代时全为成纤维细胞（。见图 3.1）
注：1：对照组；2：TGF-β1组；3：TGF-β1+DAPT组图 3.2 α- SMA 免疫细胞化学电镜结果3.3 α-SMA mRNA 及蛋白表达在 RT-PCR 产物凝胶电泳图中可见，α-SMA 与 β-actin 分别在 365bp 和 207bp处有相应的表达条带。与对照组（0.354±0.029）和 TGF-β1+DAPT 组（0.395±0.018）相比，TGF-β1 组（0.851±0.027）α-SMA mRNA 表达量明显升高，对照组和 DAPT组之间无明显差异（图 3.3，表 3.1）。α-SMA 蛋白 SDS-PAGE 电泳提示在 43KD附近可见一清晰亮带，对照组、TGF-β1 组与 TGF-β1+DAPT 组蛋白吸光光度值分别为 0.375±0.017、0.785±0.020 和 0.397±0.016，三组之间的表达规律与 α-SMAmRNA 相似（图 3.4，表 3.1）。
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R363
本文编号：2543296
【图文】：
第 3 章 结果3.1 Vimentin 免疫细胞化学培养至第三代的大鼠肺成纤维细胞，可见均为长梭形细胞，细胞大小均一。Vimentin 染色后几乎所有细胞浆内均可见棕褐色颗粒及条纹，即全为 Vimentin阳性细胞，证明胰酶消化法培养的细胞传至第三代时全为成纤维细胞（。见图 3.1）
注：1：对照组；2：TGF-β1组；3：TGF-β1+DAPT组图 3.2 α- SMA 免疫细胞化学电镜结果3.3 α-SMA mRNA 及蛋白表达在 RT-PCR 产物凝胶电泳图中可见，α-SMA 与 β-actin 分别在 365bp 和 207bp处有相应的表达条带。与对照组（0.354±0.029）和 TGF-β1+DAPT 组（0.395±0.018）相比，TGF-β1 组（0.851±0.027）α-SMA mRNA 表达量明显升高，对照组和 DAPT组之间无明显差异（图 3.3，表 3.1）。α-SMA 蛋白 SDS-PAGE 电泳提示在 43KD附近可见一清晰亮带，对照组、TGF-β1 组与 TGF-β1+DAPT 组蛋白吸光光度值分别为 0.375±0.017、0.785±0.020 和 0.397±0.016，三组之间的表达规律与 α-SMAmRNA 相似（图 3.4，表 3.1）。
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R363
【参考文献】
相关期刊论文 前1条
1 王颖;于洁;张芳婷;;Notch信号通路与细胞的增殖分化[J];广东医学;2009年07期
本文编号：2543296
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