GATA-4基因促进5-氮杂胞苷诱导的骨髓间充质干细胞向心肌分化
【图文】：
锨浚?24h后，少量BMSCs开始贴壁;72h后，大多数细胞已贴壁，贴壁细胞逐渐伸展呈多角形、纺锤形、圆形。原代培养中，细胞贴壁生长是以克隆集落的方式增殖。3～4d可见小的集落形成。7～14d，相邻集落汇合成片达80%以上，呈旋涡状或放射状排列，此时可进行第1次传代。传代培养的细胞于2～4h开始贴壁，24h内贴壁完全，形态与原代细胞相似，3～5d即可达到汇合，可以继续传代。第3代BMSCs形态基本单一，呈梭形的成纤维细胞状，细胞排列成漩涡状或放射状(图1)。图1第3代大鼠骨髓间充质干细胞(×200)Figure1ThethirdgenerationofBMSCs(×200)2．2外源性基因GATA-4转染BMSCs及表达鉴定脂质体转染后，BMSCs可见漂浮的死亡细胞，48h达高峰，之后死亡细胞数减少，细胞恢复活力，开始增殖，，于转染后72h，可汇合生长至80%～90%。应用免疫细胞化学法计算阳性细胞率，发现当质粒DNA(μg)和转染试剂Lipofectamine2000(μL)的比率为1∶2．5时，转染效率最高，故后续的转染实验均采用1∶2．5的体系比例。进行转染后48h，取细胞爬片的BMSCs做免疫细胞化学染色显示GATA-4(细胞核阳性表达)和myc蛋白(胞核胞质阳性表达)的表达情况，结果显示有部分棕黄色阳性表达细胞(图2)，说明有GATA-4和myc蛋白的表达，即成功地将pVP22-GATA-4/myc-His质粒瞬时转染入BMSCs，转染效率约为30%。空质粒组和对照组均无阳性结果。图2BMSCs转染后48hGATA-4、myc的阳性表达(免疫细胞化学染色×200)A．GATA-4胞核阳性;B．myc胞核胞质阳性Figure2GATA-4，mycpositi
【作者单位】： 河北医科大学基础医学院组织学与胚胎学教研室 河北医科大学基础医学院
【基金】：河北省高等学校科学技术研究项目(QN2016159) 河北省大学生创新性实验计划项目(USIP2017034)
【分类号】：R541
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