肝X受体激动剂T0901317对缺血再灌注损伤人脐静脉内皮细胞的作用及机制研究

发布时间：2019-10-15 18:03

【摘要】：目的：探讨肝X受体激动剂T0901317激活肝X受体（LXRs）对缺血再灌注损伤（ischemia reperfusion injury，IRI）脐静脉内皮细胞（HUVECs）的作用及其可能机制。方法：传代培养人脐静脉内皮细胞，建立缺血再灌注模型，实验分为以下6组：正常对照组，单纯缺氧组，缺血再灌注组，缺血再灌注加入低、中、高浓度肝X受体激动剂T0901317（0.1、1、10μmol／L）干预组。流式细胞术（FCM）检测各组细胞凋亡率；RT-PCR方法检测各组细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、白细胞介素-6（IL-6） mRNA表达；凝胶电泳迁移率分析法（EMSA）检测各组核转录因子-κB（NF-κB）的活性。结果： 1.与对照组比较，单纯缺氧、缺血再灌注组HUVECs的细胞凋亡率升高,ICAM-1,IL-6mRNA的表达增高，NF-κB活性增强，具有统计学意义（P0.05）。 2.与缺血再灌注组比较，缺血再灌注+T09013170.1、1μmol／L组显著减轻缺血再灌注损伤引起的细胞凋亡率增高，明显减少炎症因子ICAM-1,IL-6mRNA的表达，明显抑制缺血再灌注损伤造成的人脐静脉内皮细胞的NF-κB活化（P0.05)。 3.与缺血再灌注组比较，缺血再灌注+T090131710μmol／L组的细胞凋亡率，ICAM-1、IL-6mRNA表达水平，及NF-κB活性水平均无统计学差异（P0.05)。结论： 1.单纯缺氧、缺血再灌注诱导人脐静脉内皮细胞损伤。 2.适当剂量的肝X受体激动剂T0901317激活人脐静脉内皮细胞肝X受体，可显著减轻缺血再灌注损伤导致的人脐静脉内皮细胞凋亡，减轻炎症因子ICAM-1、IL-6的表达，对缺血再灌注损伤人脐静脉内皮细胞起保护作用。 3.其机制可能与抑制NF-κB转录活性从而下调NF-κB通路下游炎症因子如ICAM-1、IL-6的表达有关，为治疗缺血再灌注损伤提供新的思路。
【图文】：

形态图,光镜,形态

1.3 统计学处理采用 SPSS17. 0 统计分析软件处理数据，数据以均数±标准差（ x_士 s)）表示,组间比较使用单因素方差分析。P<0.05 为差异有统计学意义。2 实验结果2.1 光镜下 HUVECs 的形态接种 HUVECs 于培养瓶中，，置于倒置相差显微镜下观察，可见细胞约半小时即开始贴壁生长。当细胞融合至 70-90％时，细胞间结合紧密，可成铺路石样镶嵌排列，细胞呈扁平不规则多角形或者梭型，包膜完整，折光度良好，胞浆丰富，细胞核为圆形或椭圆形，染色质较稀疏，可见 1-2 个核仁（图 1,a）。当换入缺氧液置入设定好的三气培养箱缺氧处理后，可见到随着缺氧时间的延长细胞足收缩，变圆甚至固缩，漂浮（图 1,b）。

流式细胞技术,凋亡

图 2：流式细胞技术检测 HUVECs 凋亡。1 至 6 分别代表：CT 组，AN 组，I/R 组，I/R+T组，I/R+T 1 组，I/R+T 10 组。Fig2. The apoptosis rate of HUVECs was detected by fluorescence flow cytometry .1.CTgroup;2. AN group;3. I/Rgroup;4.I/R +T 0.1 group; 5. I/R +T 1 group;6. I/R+T 10 group.表 2：流式细胞技术检测 HUVECs 凋亡率(x_士 s，n=3)Tab2.The apoptosis rate of HUVECs detected by fluorescence flow cytometry(x_士 s，n=与 CT 组比，*P<0.05；与 I/R 组比，#P<0.05，△P>0.05；与 AN 组比，◇P>0.05。Compared with CT group ,*P<0.05 ; compared with I/R group ，#P<0.05， △P>0.05 ; compared witgroup ,◇ P>0.05.2.4 RT-PCR 方法检测 ICAM-1、IL-6 mRNA 表达组别 CT 组 AN 组 I/R 组 I/R+T 0.1组 I/R+T 1组 I/R+T 10组凋亡率 ( %） 2.54± 0.71# 5.90± 0.83*# 17.99± 2.22* 10.46± 2.75*# 6.64± 0.63*#◇ 16.34± 2.53*△
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R363

【参考文献】