gp350基因与gp350-C3d3融合基因真核表达质粒的构建表达及其功能的初步研究

发布时间：2019-10-22 15:12

【摘要】：EB病毒是全世界流行的γ型人类疱疹病毒,具有嗜B淋巴细胞性,病因学上与中国南方地区及东南亚的未分化型鼻咽癌(uNPC)、非洲赤道地区的Burkitt淋巴瘤关系密切,这两种疾病在其他地区却比较少见。 目前EB病毒及其相关肿瘤的治疗方法依然有限,鉴于病毒在这些疾病的发病机制中所扮演的重要角色,采用EB病毒蛋白抗原的分子干预措施可能是预防治疗EB病毒相关疾病的有效措施。在这些方案中,疫苗接种免疫应该是研究中的首要选择,在本课题中,我们通过基因工程技术构建了gp350和C3d3的融合质粒,希望表达的融合蛋白在进一步研究中具有特异的免疫原性。 目的构建EB病毒包膜糖蛋白gp350全长序列及其与三个补体片段C3d串联基因在人体真核细胞中表达的载体,并进行其免疫功能的初步研究。 方法以pcDNA3.1+gp350为模板PCR扩增出gp350 cDNA全长片段,将PCR产物经BglⅡ和BamHⅠ酶切消化后与经同样两个限制性内切酶消化的真核表达载体pSG.SS.YL和pSG.SS.C3d3.YL连接,转化后挑取阳性克隆进行PCR、酶切鉴定并测序;然后将纯化的重组载体用脂质体法分别转染人类Hela细胞培养24h,分别用Western blot及细胞免疫化学染色检测gp350蛋白和gp350-C3d3融合蛋白的表达。 结果成功构建含gp350全长基因序列的载体pSG.SS.gp350.YL和pSG.SS. gp350.C3d3.YL;转染人类Hela细胞后,经细胞免疫化学染色及Western blot检测显示:转染组均能常规水平表达,对照组则无该蛋白表达,但两转染组的表达量无明显差异。 结论成功构建gp350的两个真核表达质粒,并能够在人体Hela细胞中表达相应蛋白,为下一步进行在体内免疫环境下检测其生物学活性奠定基础。
【图文】：

图 2大肠杆菌 TOP10 购自北京天根公司，-72．主要试剂和仪器2.1 主要试剂Amp 柱式质粒小量提取试剂盒 BglⅡ、BamHⅠ XbaⅠ、KpnⅠ XhoⅠ GoldviewTM核酸染料 50×TAE 胰蛋白胨

图 8 测序拼接后文件截图显示酶切位点名称分别于其碱基后在圆括号标注，，中间连续碱基序列为 gp350 基因，共 2556bp(包含启动密码子及终止子)。2．载体质粒 pSG.SS.YL 和 pSG.SS.C3d3.YL 的酶切鉴定1） pSG.SS.YL/BglⅡ&BamHⅠ如下图
【学位授予单位】：第三军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R346

【共引文献】

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本文编号：2551693