人胚胎干细胞全机械法建系及定向分化为神经细胞的研究

发布时间：2019-10-23 08:42

【摘要】：人胚胎干细胞（hESCs）是发育生物学研究和再生医学研究的重要材料。不同hESCs细胞系之间的基因表达、表观遗传学模式以及分化倾向存在差异。建立更多的hESCs系有助于增加对细胞特性的了解。同时，在现有基础上优化hESCs的建系方法对于获得达到临床应用级别的hESCs至关重要。 目的：以优化的建系方法，获得hESCs细胞系并探索其向神经细胞分化的能力。方法：使用1ml注射器分离内细胞团（ICM）建立hESCs系，并将其培养于小鼠胚胎成纤维细胞（MEF）和人包皮成纤维细胞（HFF）制成的混合饲养层上，以机械法和酶消化法传代培养。随后将建立的hESCs系进行全能性鉴定，包括检测干性基因表达和体内外分化潜能。最后，将建立的hESCs细胞系于体外进行定向诱导，检测其分化成神经细胞的能力。结果：本研究使用1ml注射器以全机械法成功建立一株hESCs细胞系HN4，此细胞系具备hESCs的特性：典型的克隆形态；具有碱性磷酸酶活性；表达Oct-4,Nanog,Rex-1,SSEA-3, SSEA-4, Tra-1-60, Tra-1-81,；体外长期传代能维持正常的核型；具有在体内外分化成具有三个胚层来源组织的能力。同时，HN4能够在体外定向诱导分化成神经干细胞和神经细胞。意义：本研究创新使用的1ml注射器全机械建系法省时省力、经济、无异源化合物污染，是一项值得广泛推广的建系方法。本研究建立的hESCs细胞系具有分化全能性并且具备定向分化为神经细胞的潜能，是体外研究人胚胎发育和神经系统发育以及神经退行性疾病治疗研究的理想细胞系。
【图文】：

图 1.1. 全机械法分离 ICM 建立胚胎干细胞系[16]3.3. 全胚胎培养法由于目前真正用于 hES 研究的胚胎大多数是由于质量较差而被捐献的胚许多囊胚可能形态不是很好，ICM 很小或不明显，这样就给免疫外科法和机离法带来困难。Kim 等[17]将此类胚胎经过自然孵化或酶解法脱掉透明带后直种于饲养层细胞上，通过反复传代提出 TE 细胞和已分化的细胞，并成功建hES 细胞系。该方法的优点是操作简单、分离过程无动物源物质污染。但是未去除 TE 细胞，需要经过更多代数的传代纯化才能建立 hES 细胞系，建系较低。3.4. 激光法2008 年，，Cortes 等人用激光打孔破坏滋养外胚层的方法提高小鼠 ICM和 ES 细胞建系的效率[18]，很快激光作为代替免疫外科法的方法同样被用于

建立HN4
【学位授予单位】：上海交通大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R329

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本文编号：2552022