喜马拉雅旱獭疫源地鼠疫菌特征研究

发布时间：2019-11-02 16:18

【摘要】：我国存在着世界上面积最大、最为复杂多样的鼠疫自然疫源地,其中,青藏高原喜马拉雅旱獭鼠疫自然疫源地是发生动物鼠疫流行和人间鼠疫病例最多的疫源地之一。因此,系统研究喜马拉雅旱獭鼠疫自然疫源地鼠疫菌的特征是我国鼠疫防治工作的重要组成部分,本研究包括两部分内容,即喜马拉雅旱獭疫源地鼠疫菌默认编码序列差异位点特征的研究和用重组鼠疫菌素(Pst)检测动物和人血清中Pst抗体的研究。 一选择喜马拉雅旱獭疫源地的青藏高原型测序菌株Z176003的CDS序列与Default数据库中的默认编码序列进行比对,通过分析与Z176003和云南玉龙测序菌株D106004基因组CDS位点的差异,并在青藏高原及相邻鼠疫自然疫源地鼠疫菌(119株)中进行验证,了解这些特征的分布情况和稳定性。结果显示：在6个基因位点(M4,12,3,6,8,9)基础上,所有实验菌株表现为型间出现差异,而型内高度一致。Ⅰ类西藏那曲、比如等地区的同型菌株与Z176003的测序结果完全一致,在上述位点保持了基本的原始状态。Ⅱ类青藏高原地区菌株和青海田鼠菌株在M4,12位点保持与Z176003一致的原始状态前提下,则在3,6,8,9位点分别出现了750bp,432bp,1446bp,2040bp的缺失。这些菌株的分离时间跨度为50多年,其分布的范围包括西藏、青海、四川及甘肃的大部分喜马拉雅疫源地,表明3,6,8,9位点在进化过程中是比较活跃的,并已经在这些地区形成了相对稳定的遗传学特征。Ⅲ类菌株主要包括滇西山地和玉龙的菌株,首先在M4、12位点发生了点突变,并表现为单个氨基酸的改变；同时在3,6,8,9位点也分别出现了750bp,432bp,1446bp,2040bp的缺失,显示了与以上两种类型疫源地鼠疫菌不同的特征,并稳定存在于云南西北部的鼠疫自然疫源地。 二选取鼠疫菌的特异基因pst的重组克隆子经IPTG诱导,使其在宿主菌E.coliBL21中稳定高效地表达,用Ni-NTA柱亲和层析技术纯化并透析和浓缩的Pst抗原为基础的ELISA间接法与鼠疫F1抗体的检测方法,对青海省喜马拉雅旱獭鼠疫自然疫源地内大量不同地区、宿主以及时间的动物和人血清样本(375份)进行了平行检测,分析结果显示：人或动物感染鼠疫菌后,早期血清中F1抗体达到一定水平时,Pst抗体才出现,并且随着F1抗体的升高而升高,数月后仍维持在可检出的水平。因此,当动物或人发生鼠疫感染之后,由鼠疫菌产生的Pst抗原应该能够刺激机体产生相应的Pst抗体。但是,如果在F1抗体水平较低的情况下,尚未检出Pst抗体时,仍然不能排除鼠疫感染的可能性。重组Pst作为一种新型的鼠疫血清学辅助诊断试剂与经典的鼠疫检测方法相结合,有助于解决鼠疫监测现场工作中遇到的各种问题,使鼠疫的抗体检测方法更具可靠性。
【图文】：

引物C1部分菌株测序结果比较

图6引物12部分菌株测序结果比较2.CDS上基因缺失的菌株的PCR扩增电泳结果在图7中PCR结果(一)，表示菌株中缺失目地CDS;同理，PCR结果(+)，，表示菌株中存在此目地CDS。M7系列多数菌株(113八19)PCR(+)，此特征与菌DIO6004相同，PCR(一)的特点与菌21760()3相同:3，6，8，9系列多数菌株(102/119)PCR卜)，此特征与菌DIO6004一样，PCR(+)的特点与菌2176003一样。23
【学位授予单位】：中国疾病预防控制中心
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R378

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本文编号：2554594