雄激素在血管内皮细胞损伤修复过程中的作用及信号机制研究

发布时间：2019-11-02 15:29

【摘要】：[目的] 观察雄激素在血管内皮细胞损伤修复过程中的积极作用,研究其促进细胞修复、抑制凋亡的分子信号途径,初步探讨雄激素替代治疗保护血管内皮细胞的临床可行性。 [方法] 1.离体细胞实验采用H2O2(100μM)损伤血管内皮细胞(ECV-304细胞)18小时建立离体细胞凋亡模型,实验组予以不同浓度二氢睾酮(0.01,0.1,1μM)预处理2小时,利用荧光显微镜观察细胞形态变化,MTT方法检测细胞活性改变,Annexin V-FITC/PI标记的流式细胞技术检测凋亡细胞比例,Western blot方法检测Caspase-3、Caspase-9和phospho-p38MAPK表达。 2.整体动物实验应用球囊导管损伤雄性去势大兔的髂动脉内膜,建立内膜损伤并雄激素水平低下的整体动物模型,实验组肌注不同浓度十一酸睾酮(3mg/kg,6mg/kg,12mg/kg),利用光镜和扫描电镜观察血管内膜和内皮细胞的修复情况。 [结果] 1.细胞形态学观察(荧光显微镜) ①正常对照组和二氢睾酮(1μM)对照组：细胞贴壁生长,大小比较一致,形态规则呈梭形,胞膜完整,没有明显凋亡迹象； ②H2O2损伤组：多数细胞体积缩小,与周围细胞脱离,胞膜仍完整,核质浓缩,核膜核仁破坏,呈现明显的凋亡形态学改变； ③三组不同浓度二氢睾酮预处理组：细胞呈现抗凋亡迹象,高浓度二氢睾酮(1μM)预处理组,细胞形态与正常对照组非常接近。 2.细胞活性观察(MTT法) 正常对照组和二氢睾酮对照组细胞活性无明显差异,H2O2损伤组细胞活性显著下降。经过二氢睾酮预处理,细胞活性逐渐恢复,特别是大剂量二氢睾酮预处理后,细胞活性与正常对照组无明显差异 3.流式细胞技术检测细胞凋亡(Annexin V-FITC/PI标记) 正常对照组凋亡细胞比例2.95%,二氢睾酮对照组3.92%,H2O2损伤后凋亡细胞比例高达49.96%。经过二氢睾酮预处理,凋亡细胞逐渐下降至33.54%、20.04%和6.76%,高浓度二氢睾酮预处理组凋亡细胞接近正常对照组。 4.凋亡相关因子caspase-3,caspase-9和p-p38MAPK检测(Western blot法) H202损伤组,活性片段Caspase-3、Caspase、9和p-p38MAPK条带最明显,经过二氢睾酮预处理的三个实验组,条带逐渐变淡,高浓度二氢睾酮预处理组条带亮度与正常对照组接近。 5.雄激素替代治疗对血管内皮细胞修复情况(整体动物实验) 光镜下正常对照组内膜无明显增生,单纯球囊损伤组内膜增生最明显,不同浓度十一酸睾酮替代治疗组,血管内膜增生逐渐改善。扫描电镜下正常对照组血管内皮细胞呈梭形,排列有序,大小均一；单纯去势组,内皮细胞完全破坏,罕见完整细胞；不同浓度十一酸睾酮替代治疗组,内皮细胞排列逐渐规则,形态逐渐呈梭形,大小逐渐均一,其中高浓度组内皮细胞接近正常对照组。 [结论] 雄激素具有抑制血管内皮细胞凋亡、促进损伤修复的作用,合适浓度范围内,该作用呈现剂量依赖性；caspase-3, caspase-9和p-p38MAPK活性片段表达水平下降与雄激素的这一保护作用有关。在动物水平,雄激素替代治疗具有保护内皮细胞、修复内膜的作用。
【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R363

【参考文献】