iTRAQ多重化学标记串联质谱技术在蛋白质组学中的应用

发布时间：2019-11-04 09:31

【摘要】：i TRAQTM是2004年美国应用生物系统公司(Applied Biosystems Incorporation,ABI)最新推出的一种多肽体外标记试剂,该技术可对复杂样本、细胞器、细胞裂解液等样本进行相对和绝对定量研究,具有较好的定量效果、较高的重复性,并且弥补了DIGE及ICAT的不足,正迅速被广大学者所接受。主要从i TRAQ实验原理、实验流程、i TRAQ与其他定量蛋白质组学方法的比较等3个方面进行简要总结。
【图文】：

杀取６鈍诖針?质谱检测的时候，同重元素标记肽段部分裂解，标记蛋白则被分解为报告部分、平衡部分和氨基酸部分。报告部分在MS/MS图上表现为诊断离子(diagnosticions)质荷比在114～117或113～121之间。串联质谱检测的诊断离子量的比值，代表了不同iTＲAQ试剂标记的不同样品之间的同一蛋白质量的变化。iTＲAQ优点是能够标记没有CyDye染料标记位点的肽段，iTＲAQ唯一的缺点是样品需要先用胰酶(tryptic)消化裂解。这样可能在样品处理时会出现误差。因此，保证iTＲAQ前期样品处理条件的一致性很重要，见图1、插页Ⅲ图2。图14种同位素标签的iTＲAQ试剂结构及机理示意图2iTＲAQ实验流程实验流程主要是:样本还原、变性、半胱氨酸封闭;胰蛋白酶消化蛋白;消化蛋白的iTＲAQ试剂标记;标记蛋白的混合;LC－MS/MS质谱检测及分析［4］。利用还原剂［磷酸3(2－氯乙基)酯，tris－(2－carboxyethyl)phosphine，TCEP］对样本蛋白质还原并用半胱氨酸封闭剂封闭，加入胰蛋白酶消化蛋白后用iTＲAQ试剂标记，充分标记后的蛋白质样品用强阳离子交换色谱柱纯化;用QSTAＲ屮XL及QTＲAP屮质谱仪检测后用ProQUANT软件分析。也可用4700蛋白质分析系统检测后用GPSExplorerTM3．0软件分析。分析结果可直接从Celera识别系统获得蛋白质功能、生物学特性及其他生物信息，也可以与相关的基因数据库连接。最近Shadforth等开发了i－Tracker软件，，可以通过noncentroided串联质谱峰列表中提取离子峰报告率，并可以很容易与Mascot及Sequest蛋白质鉴定工具连接［5］。3iTＲAQ多重化学标记串联质谱技术与其他定量蛋白质组学方法的比较［6］3．1双向凝胶电泳(2－DE)虽然蛋白组学概念仅近几年出现，但其双向凝胶电泳技术可以追溯到1975年。2－DE技术由O’Farre

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本文编号：2555581