人骨髓间充质干细胞体外向内皮细胞诱导分化及内皮样细胞的特性研究

发布时间：2019-11-14 08:48

【摘要】：目的：通过研究在体外经化学诱导剂对人大隐静脉来源的血管内皮细胞和骨髓间充质干细胞进行分离并向内皮细胞分化培养,比较两种来源内皮细胞的生物学特性及细胞功能,分析作为种子细胞的可行性,为将来组织工程中的应用提供一定的研究基础。 材料：在无菌状态抽取我科手术患者胸骨骨髓10ml；取CABG术中剩余的大隐静脉段。 方法：采用胶原酶消化法在体外分离培养大隐静脉血管内皮细胞(hECs);用密度梯度离心法分离培养人骨髓间充质干细胞(hMSCs),并在体外经VEGF、bFGF及ECGF因子向内皮细胞诱导分化(hMSC-ECs),观察细胞前后生物学特征,描述细胞周期及生长曲线；流式细胞仪(FCM)测定分化细胞的诱导率；免疫组化鉴定细胞表面抗原标志Vimentin及α-SMA,内皮细胞特异性标志抗原CD31、CD34、Ⅷ因子；并用Western blot方法测定Ⅰ型胶原蛋白,测定内皮细胞功能指标(NO, PGI2, ET-1及t-PA),进行统计学比较分析。 结果：人大隐静脉来源的内皮细胞分离培养初期生长增殖较慢,免疫组化染色示抗原CD34, CD31及Ⅷ因子阳性；人骨髓间充质干细胞分离培养生长增殖速度快,呈成纤维细胞方向生长；免疫组化示表达Vimentin及α-SMA,诱导后还表达CD31, CD34及Ⅷ因子相关抗原。Western blot结果显示三种细胞均有分泌Ⅰ型胶原蛋白的功能;测定细胞功能示：hECs组中ET-1及PGI2的含量明显高于其余两组的含量(p0.01)；三组中细胞t-PA的含量无明显差异p0.05)；NO含量测定示,hECs组与hMSC-ECs组间无明显差异却均明显高于hMSCs组p0.05)。冻存复苏后细胞各项特性功能无明显变化。 结论：分别来源于人大隐静脉和骨髓组织的hECs, hMSCs在体外利用胶原酶消化法和密度梯度离心法可以成功进行分离、培养及扩增,且在体外条件下可成功向内皮细胞方向诱导分化,以hMSCs诱导前后生长能力和细胞功能均较强,即使年龄处于中老年阶段者仍然能分离出足够的细胞数,获取较为简便,且已基本具备内皮细胞的功能；hECs及hMSCs均可成为组织工程的种子细胞,虽然hECs在整体的细胞功能上稍高于hMSCs,但hMSCs具有的特殊生物学特性极有希望成为种子细胞的最佳选择。
【图文】：

hMSCs及hMSC一ECs的生长曲线图

hECs生长曲线
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R329

【参考文献】

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1 黄盛东 ,刘晓红 ,杨立信 ,龚德军 ,刘延玲 ,徐志云;血管内皮细胞生长因子基因转染诱导大鼠骨髓基质干细胞分化为内皮细胞[J];第二军医大学学报;2003年12期

2 杨立信 ,徐志云 ,张宝仁 ,黄盛东 ,刘延玲;体外诱导骨髓基质干细胞向内皮细胞分化的实验研究(英文)[J];第二军医大学学报;2003年12期

3 丁伟荣;吴晓牧;饶燕飞;杨志刚;柳U，

本文编号：2560732