透明质酸凝胶中诱导肌源性干细胞分化为软骨样细胞

发布时间：2019-12-01 09:42

【摘要】：目的 确定适合兔肌源性干细胞(muscle-derived stem cells, MDSCs),生长的透明质酸凝胶浓度;建立兔关节软骨细胞分离、培养的新方法;以软骨细胞为诱导因素,于透明质酸凝胶中“诱导肌源性干细胞分化为软骨样细胞”,并对诱导后细胞进行鉴定;探讨肌源性干细胞与软骨细胞,混和培养体外成软骨的可行性。 方法 分离培养、扩增传代兔MDSCs及关节软骨细胞,二者按一定比例混和,6×1010/L密度接种于5%浓度的透明质酸凝胶为共培养组,以相同密度的单纯MDSCs和单纯软骨细胞作为阴性与阳性对照。倒置相差显微镜下观察,10d后行甲苯胺蓝染色和Ⅱ型胶原免疫细胞化学检测,RT-PCR检测Ⅱ型胶原和aggrecan的mRNA表达。 结果 MDSCs于各不同浓度的透明质酸凝胶中生长状态均良好;兔关节软骨经混合酶消化后,可获得纯度较高,活力较强的软骨细胞,经免疫组化及甲苯胺蓝染色呈阳性结果。软骨细胞于透明质酸凝胶中诱导肌源性干细胞,5d后镜下见共培养组MDSCs形态由梭形向多边多角形转化,10d后细胞甲苯胺蓝染色和Ⅱ型胶原免疫组织化学检测与阳性对照组相同,RT-PCR检测Ⅱ型胶原和aggrecan mRNA呈阳性表达。阴性对照组在体外培养过程中未分化为软骨细胞. 结论 MDSCs在不同浓度的透明质酸凝胶中生长状态未发生变化;利用混合酶消化法可以获得纯度较高,活力较强的软骨细胞,软骨细胞通过体外的单层培养进行扩增时,四代以后的细胞失去软骨细胞的表型,不适合应用于其它相关实验;软骨细胞培养液可诱导透明质酸凝胶中的肌源性干细胞向软骨细胞转化,具有很好的临床应用潜能。
【图文】：

Table 1 The rate of MDSCs differentiation（%）(x—±s,n=10)ps 3d 6d 10ive controlve controlpced group1.3±0.43186.4±0.18627.7±2.549*2.7±0.53289.58±1.54752.3±5.142*3.1±094.57±77.1±8注：与对照组相比：* P＜0.05RT-PCR细胞经 RT-PCR 扩增后，，共同培养组和阳性对照组可见Ⅱ型胶原和 ag达，说明经诱导的细胞中表达Ⅱ型胶原和 aggrecan 的 mRNA，而阴未见表达(图 11)。

细胞质Desmin染色阳性
【学位授予单位】：辽宁医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R329

【参考文献】

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本文编号：2568322