关于Eaf2负向调控生发中心B细胞生存的作用研究

发布时间：2020-01-21 10:26

【摘要】：在小鼠的二级淋巴器官中,生发中心(GC)B细胞是一个有着极其特别作用的B细胞群体。他们通常产生于由胸腺细胞依赖性抗原(T-dependent antigen)所引发的免疫应答中。这些有极快分裂能力的生发中心B细胞内会发生体细胞高频突变(SHM)和免疫球蛋白不同类型间的转换重组(CSR)。通过筛选,对相应抗原具有高亲和力的细胞得以生存,并分化繁殖成为可分泌抗体的浆细胞和记忆性B细胞。但是,在免疫应答中,调控生发中心B细胞存活的机制仍不清楚。 我们发现在生发中心B细胞中,ELL结合因子2(Eaf2)有特异性的高表达量。而且在正常小鼠B细胞中过量表达EAF2蛋白可导致显著的细胞死亡增多。为了进一步研究在B细胞中Eaf2的作用,我们在C57BL/6背景下制作了Eaf2全身敲除小鼠。这种小鼠的B细胞在骨髓中的发育和脾脏中的成熟都表现正常,不同刺激下的细胞繁殖速度和血清中免疫球蛋白浓度也基本正常。 但是,在体外培养并加入不同刺激时,派氏淋巴集结(Peyer's patches)中的生发中心B细胞存活情况明显好于对照组。同时,在胸腺细胞依赖性抗原NP-CGG免疫两周后的脾脏切片免疫组化染色中,通过原位末端转移酶标记(TUNEL)检测细胞凋亡时,Eaf2敲除小鼠的生发中心B细胞凋亡明显减少。同时,PNA阳性生发中心组织平均面积扩大到了约对照组的两倍。 在免疫Eaf2敲除小鼠两周后,不仅生发中心B细胞增多,记忆性细胞的比例也有上升。但是,这两种细胞的比例在免疫后的第六周和第九周下降到了正常水平。相比于对照组,Eaf2敲除小鼠的总亲和力和高亲和力抗体生产均有增加。免疫球蛋白JH4内含子区域的体细胞高频突变频率保持正常。但NP抗原特异性的VH186.2序列的总突变频率和氨基酸替换突变率有所下降,说明敲除鼠的抗体亲和力成熟(antibody maturation)受到影响。最后,通过细胞移植试验,我们证明了Eaf2缺失并不损害免疫二次应答。 以上结果充分证明Eaf2可导致生发中心B细胞凋亡,它对于阻止生发中心过度扩张和促进B细胞抗体亲和力成熟都有作用。这是目前发现的唯一可以直接影响由胸腺依赖性抗原刺激形成的生发中心面积的因子。我们的研究对于深入探讨免疫应答中生发中心的反应机理,记忆性细胞和浆细胞的分化机制提供了新的见解。
【学位授予单位】：南京大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R392

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本文编号：2571547