人脂肪来源干细胞上清液对裸鼠皮肤创面愈合的影响

发布时间：2020-01-28 12:48

【摘要】：目的：分离培养脂肪干细胞(adipose-derived stem cells, ADSCs),探讨其培养上清液对创面愈合的影响。方法：经患者知情同意，华中科技大学药物临床试验伦理委员会批准，取华中科技大学同济医学院附属协和医院整形外科腹部供皮区患者皮下废弃脂肪组织约5g，分离、培养脂肪干细胞，经鉴定并部分成功向成脂和成骨诱导确认为干细胞，提取其第3～5代脂肪干细胞上清液。在BALB/c裸鼠的背部两侧各去除一个直径为6mm的圆形全厚皮片，形成两个皮肤全层缺损创面，左侧设为对照组，右侧设为实验组，共16只。使用夹板固定以防止创面收缩。取200ul脂肪干细胞上清液（conditioned medium of HumanAdipose-derived Stem Cells ADSCs-CM），分上、下、左、右四点平均注射于创面组织内，每点30ul，剩余80ul喷洒创面表面；左侧创面设为自身对照，单纯应用不含血清的细胞培养液DMEM/F12，方法同上。分别于术后3、4、5、7、9和10天使用Image Proplus6.0图像处理软件测量创面大小，计算创面的愈合率；记录各个创面愈合时间；术后7天和25天取创面组织做HE染色，进行组织学分析。结果：取自人腹部皮下脂肪经分离、培养3天后,可见贴壁的ADSCs呈梭形。细胞免疫荧光检测ADSCs特异性标志物CD44、CD105表达阳性, CD34和CD45表达阴性，并成功向成脂和成骨分化。在术后第3、4、5、7、9和10天，实验组创面愈合率在第3、7、9天时明显高于对照组(P0.05)，其差异有统计学意义，而在第4、5、10天时虽高于对照组，但P0.05,没有统计学意义；组织病理学检查可见，术后第7天实验组呈现明显炎性细胞浸润，其毛细血管增生程度及肉芽组织厚度均较对照组高，实验组肉芽组织厚度高于对照组（P＜0.05）；实验组毛细血管密度高于对照组(P0.05）；在术后第25天，实验组创面真皮层厚度较与对照组增厚，其差别有统计学意义（P＜0.05）。实验组创面愈合平均时间为9.67±1.37天，对照组为12.08±0.9天，其差异有统计学意义（P＜0.05）。结论：人腹部皮下脂肪组织中可成功分离、培养干细胞；脂肪来源干细胞上清液可促进创面愈合，增加皮肤组织中真皮层厚度。
【图文】：

示意图,创面,模型,示意图

华中科技大学硕士学位论文15图1 创面模型示意图。A：将圆规定长为6mm；B：使用美兰在裸鼠背部中线两侧画出拟切除的创面；C：在老鼠背部切取直径为6mm的圆形创面；D：环形硅胶圈放在创面周围，0/5尼龙线将硅胶圈间断缝合在创缘周围；E：透明粘贴薄膜封闭双侧创面；F：双侧创面分别注射200ul药物，右侧设为实验组，注入ADSCs-CM，左侧设为自身对照，，注入DMEM/F12。1.8 创面分析分别在裸鼠创面的第3天、4天、5天、6天、7天,9天和10天使用数码相机（PENTAX

脂肪,干细胞,第三,梭形

华中科技大学硕士学位论文2 结果2.1 ADSCs的特征：第3代ADSCs培养3天后，观察到贴壁的细胞呈长梭形（图1）细胞免疫荧光检测显示：脂肪干细胞特异性标志物CD44 和 CD105表达呈性,CD34和CD45表达阴性(图3)。
【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R329

【参考文献】