小鼠腔前卵泡体外培养体系二维法和三维法的比较

发布时间：2020-02-26 17:20

【摘要】：目的 比较小鼠腔前卵泡体外培养体系二维法及三维法，通过观察比较二维液滴法和三维海藻酸钠明胶法体外卵泡的存活及生长情况、产生激素能力及卵母细胞成熟情况，来选择优化的小鼠腔前卵泡体外生长培养体系。 方法 经机械法分离得到出生12-14天C57BL/6J小鼠的单个卵泡，选择直径在80-130μm的结构完整的腔前卵泡，分别使用二维96孔板液滴法和三维96孔板海藻酸钠明胶法体系进行体外培养，在添加了10%血清、5.5mg/mlPNa、ITS、5ng/mlEGF及100mIUr-FSH的a-MEM培养基中共培养7天。隔天1/2换液，并使用倒置显微镜及Image J软件拍照并测量卵泡直径，使用免疫荧光分析法检测换液培养基的激素浓度。 结果 二维液滴法和三维海藻酸钠明胶法两体系中，，卵泡的生存率及闭锁率无统计学差异；二维液滴法中卵泡直径增长速度快于三维海藻酸钠明胶法体系，且差异从第3天开始出现（1.12±0.154:1.11±0.148），并逐渐增大至第7天的最大值；两体系中产生雌二醇浓度差异不明显；培养结束时，二维液滴法中卵泡的卵母细胞恢复减数分裂至MI期（61%：4%）、MII期（17%：8%）的比例大于三维法培养的卵泡。 结论 小鼠腔前卵泡体外培养体系中二维液滴法中卵泡的生长速度及卵母细胞恢复减数分裂成熟状况均优于三维海藻酸钠明胶法。因此，二维液滴法小鼠腔前卵泡体外培养体系更加有利于卵泡的生长发育及卵母细胞的成熟。
【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R321.1

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本文编号：2583052