绿原酸对大鼠骨髓间充质干细胞体外培养及诱导分化的影响

发布时间：2020-02-27 08:10

【摘要】：背景：研究表明,绿原酸是中药杜仲中的主要活性成分之一,杜仲具有补中、益精气、坚筋骨、强志的作用。 目的：研究绿原酸对大鼠骨髓间充质干细胞体外培养及诱导分化的影响。设计、时间及地点：随机对照动物细胞实验,于2010年3月至2010年9月在南昌大学第二附属医院分子中心实验室完成。 材料：选用清洁级2周龄SD大鼠12只,绿原酸由江西中医学院药理实验室提供。 方法：在无菌条件下取2周龄SD大鼠的股骨、胫骨骨髓,采取密度梯度离心法与贴壁细胞分离法相结合分离培养大鼠的骨髓间充质干细胞,加入含10%胎牛血清的LG-DMEM培养液中培养,取第三代细胞用于实验。取lmg绿原酸,溶解于细胞冻存液DMSO中,依次稀释成含绿原酸10-8、10-9、10-10,10-11g/L的试剂,加入实验组的骨髓间充质干细胞中。对照组为空白试剂组和传统成骨诱导剂组,每日于倒置显微镜下观察细胞生长情况及形态变化,于培养第24,48,72小时用四唑盐法检测细胞的增殖情况,于培养第3周用Von Kossa法检测钙结节,免疫组化检测Ⅱ型胶原的表达。 结果：12只大鼠均进入结果分析。MTT法证实了实验组与对照组在传代后24小时细胞增殖缓慢,两组差异无显著性(p0.05),48小时两组出现差异(p0.05),72小时进入细胞对数生长期,两组差异显著(p0.01)。镜下观察实验组骨髓间充质干细胞大量诱导分化为成骨细胞,与传统成骨诱导剂相比无显著差异,Von Kossa法鉴定钙结节表明传统成骨诱导剂组的钙结节大,形状规则,着色深,而实验组钙结节形状不规则,着色浅,随着浓度的下降其钙结节也不明显,与传统成骨诱导剂相比无显著差异。免疫组化染色结果表明不论是传统成骨诱导剂组还是绿原酸组,都不表达Ⅱ型胶原。 结论：绿原酸可以促进体外培养的骨髓间充质干细胞增殖及向成骨细胞分化,但其效果与其浓度呈一定的正相关,可能不具有向成软骨细胞分化的效果。
【图文】：

让大鼠骨髓间充质干细胞自然贴壁，第二天观察时可见部分细胞已经贴壁;贴壁细胞多呈三角形、多角形或短梭形;3天后换液去除未贴壁细胞，贴壁细胞体积增大，呈集落生长(见图1);当贴壁细胞达到80%融合时可以传代，传代后骨髓间充质干细胞呈有序的旋涡状排列，，形态类似成纤维细胞，但也可见较多的单核细胞。(见图2)，消化传代后第二天见细胞贴壁散在生长，3天换液，6天可见细胞大部融合，呈现成纤维细胞样(见图3)，连续传代，细胞形态无明显改变(见图4)。、.O.忿声。价..户、尝护.?钊户、气冲""?9产丫。妇.、丸自，补、心、吃.‘.心奋咤刁尸、沙

本文编号：2583228