骨膜提取物诱导小鼠骨髓间充质干细胞分化为类成骨细胞的实验研究

发布时间：2020-03-17 09:45

【摘要】：目的 根据骨髓间充质干细胞(BMSCs)分化位点特异性,应用小鼠骨膜提取物来诱导小鼠骨髓间充质干细胞分化,观察其诱导分化的情况。 方法 将小鼠颅骨骨膜提取物与小鼠骨髓间充质干细胞体外共培养,诱导小鼠骨髓间充质干细胞向类成骨细胞分化。实验分为对照组(单纯BMSCs)和实验组(骨膜提取物诱导分化的细胞),应用倒置显微镜观察诱导后细胞形态的变化;应用碱性磷酸酶(ALP)染色法检测诱导分化后细胞的成骨活性;应用免疫印迹技术检测BMP-2蛋白的表达情况;应用RT-PCR方法检测BMP-2、Ⅰ型胶原、骨钙素基因的表达情况。 结果 形态学观察显示,BMSC细胞呈梭形,骨膜诱导分化后变成三角形、多角形、立方形;ALP活性结果显示,诱导分化后ALP活性远高于BMSC细胞,约为其六倍,两者差异具有显著统计学意义(P0.01);蛋白印迹结果显示,BMSC细胞组不表达BMP-2蛋白,经骨膜提取物诱导分化后BMP-2蛋白表达增高,两组差异有显著统计学意义(P0.01);RT-PCR结果表明,小鼠BMSC细胞不表达BMP-2、Ⅰ型胶原、骨钙素基因。经骨膜提取物诱导分化后可以检测到BMP-2(708bp)、Ⅰ型胶原(222bp)、骨钙素(219bp)基因的表达。β-actin为内参。 结论 骨膜提取物可以诱导小鼠骨髓间充质干细胞分化为类成骨细胞,分化的细胞具有成骨细胞的特性,此方法简单易行,并且分化效果很好,为骨组织工程提供一种新的类成骨细胞培养方法。
【图文】：

胶电泳观察 PCR 产物后，短波紫外灯下观察扩增产物照相。学分析均用 SPSS16.0 软件包进行统计学分析，计量资料示，两组间比较采用 t 检验，，以 P<0.05 为差异有统结 果观察镜观察，原代小鼠 BMSC 细胞约 10-14d 长满培养 3d 后开始增殖，形态多呈长梭形（图 1A）；而经过胞形态发生明显的改变，呈三角形、多角形和立方AGCAAGAGATGG ATCTCCTTCTGCATCCTGTCG

1 B 倒置显微镜下经骨膜提取物诱导后的细胞(×1提取物诱导的细胞贴壁生长，形态发生明显变化，多呈三性检查质干细胞的 ALP 活性很低，OD405/OD550 值为 0导后 ALP 活性显著升高，OD405/OD550 值为 0.60.01）。结果见表 2，图 2。碱性磷酸酶（ALP）染色检测两组细胞 OD405/550别 ALP t 值 组 0.11±0.01 组 0.62±0.0518.936
【学位授予单位】：辽宁医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R329

【参考文献】

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本文编号：2587497