防龋基因疫苗pVAX1-SA、pVAX1-GC和pVAX1-SG经不同途径免疫新西兰大白兔的实验研究

发布时间：2020-03-18 00:02

【摘要】：目的：观察防龋基因疫苗pVAX1-SA、pVAX1-GC和pVAX1-SG经肌肉注射、颌下腺区皮下注射和鼻腔粘膜滴注免疫新西兰大白兔后的免疫效果,并探索免疫的最佳途径。 方法：本研究包括两部分：实验一：重组质粒pVAX1-SA、pVAX1-GC和pVAX1-SG及载体质粒pVAX1的鉴定和大量制备。1.先小量抽提储存的重组质粒pVAX1-SA、pVAX1-GC和pVAX1-SG及载体质粒pVAX1。2.限制性内切酶酶切鉴定重组质粒pVAX1-SA、pVAX1-GC和pVAX1-SG及载体质粒pVAX1是否正确。3.在鉴定正确的基础上,大量抽提重组质粒pVAX1-SA、pVAX1-GC和pVAX1-SG及载体质粒pVAX1,紫外分光光度计测定所抽提质粒的OD值,并计算其浓度和纯度,贮存以备免疫动物。实验二：基因疫苗pVAX1-SA、pVAX1-GC和pVAX1-SG免疫新西兰耳大白兔。1.动物选择与分组：A大组：9只1.5kg新西兰大白兔,随机分为3组,每组3只。A1组：pVAX1-SA股四头肌注射组；A2组：pVAX1-SA颌下腺区皮下注射组；A3组：pVAX1-SA鼻腔粘膜滴注组。B大组：9只1.5kg新西兰大白兔,随机分为3组,每组3只。B1组：pVAX1-GC股四头肌注射组；B2组：pVAX1-GC颌下腺区皮下注射组；B3组：pVAX1-GC鼻腔粘膜滴注组。C大组：9只1.5kg新西兰大白兔,随机分为3组,每组3只。C1组：pVAX1-SG股四头肌注射组；C2组：pVAX1-SG颌下腺区皮下注射组；C3组：pVAX1-SG鼻腔粘膜滴注组。D大组(对照组)：6只1.5kg新西兰大白兔,随机分为2组,每组3只。D1组(阴性对照组)：pVAX1股四头肌注射组；D2组(空白对照组)：生理盐水股四头肌注射组。2.免疫时间：共免疫3次,首次免疫后间隔1周以同样剂量加强免疫1次,再间隔2周进行第2次加强免疫。3.样品采集时间：分别于免疫前1天和免疫后第1,2,3,4,6,8,10周收集血清和唾液样本。4.特异性抗体的检测：血液和唾液中IgG和SIgA特异性抗体采用酶联免疫吸附实验(间接ELISA法)检测。 结果：①在重组质粒小量抽提、鉴定无误的基础上,应用特大型质粒纯化试剂盒抽提出高纯度、高浓度的质粒。②经酶联免疫吸附实验证明,免疫后血清IgG型特异性抗体和唾液SIgA型特异性抗体均明显升高,并持续数周。且鼻腔滴注组和颌下腺区皮下注射组比肌肉注射诱导唾液IgA型特异性抗体要多。 结论：①基因疫苗pVAX1-SA、pVAX1-GC和pVAX1-SG可以诱导新西兰大白兔产生特异性IgG和SIgA抗体,表明三种防龋基因疫苗均有较好的免疫原性；②pVAX1-SG鼻腔滴注和颌下腺皮下注射免疫诱导的唾液SIgA型抗PAc和抗GTF抗体水平高于股四头肌注射免疫。提示鼻腔黏膜滴注和颌下腺区域皮下注射免疫可能是pVAX1-SG的有效免疫途径。
【图文】：

质粒大量抽提结果Plasmidmassiveextraetionresults质粒()D:。‘)OD:、(，纯度(OD:11、，/ODZ、，，)浓度(()D:。、(，火50火20O自l以钊勺乃‘门

本文编号：2587894