改良的带血管髂骨移植动物模型建立

发布时间：2017-03-21 04:03

  本文关键词：改良的带血管髂骨移植动物模型建立，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：移植是治疗终末期器官衰竭和局部组织严重损伤的理想方法。然而术后宿主的排斥反应却不可避免。随着环孢素A等跨时代的免疫抑制剂的出现,移植迎来崭新的机遇。但是,由免疫抑制剂带来的副作用仍严重影响患者的生存质量。因此,如何减少或撤除免疫抑制剂是现阶段的重要目标。目前临床上主要尝试应用骨髓移植(bone marrow transplantation,BMT)进行免疫耐受的诱导。而从复合组织同种异体移植(composite tissue allotransplantation,CTA)中衍生出来进行带血管骨髓移植(vascularized bone marrow transplantation,VBMT),则是一种独特的骨髓移植方式,其中的骨髓细胞、骨和骨髓基质微环境一同被移植到了宿主中。相比于单纯的骨髓细胞输注,它可以持续产生供者骨髓细胞,此外,VBMT可避免清髓处理,少有发生移植物抗宿主病(graft versus host disease,GVHD)。目前的研究表明,VBMT具有建立嵌合现象,并诱导免疫耐受的潜能。而绝大多数VBMT的动物模型主要以股骨为主,但从临床转化的角度考虑,髂骨作为带血管骨髓移植,更有可能应用到临床上,因此改良并建立一种更可行的带血管髂骨移植的动物模型,具有更明显的使用价值。目的:(1)探索一种相对简单、稳定的大鼠带血管髂骨移植手术方式,为其建立嵌合现象、诱导免疫耐受的研究建立可靠的动物模型。(2)检测带血管髂骨移植术后是否能建立嵌合现象,移植区进行Micro-CT扫描和三维重建,判断移植髂骨骨密度变化。(3)动态监测外周血CD4+/CD8+T细胞的比值变化和血清白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)水平变化,和正常大鼠比较,判断产生嵌合状态的大鼠术后免疫状态。方法:(1)雄性Sprague Dawley(SD)大鼠为供者,雌性SD大鼠为受者,进行改良手术,即剥离供者臀大肌,将供者的髂骨连带肌肉及皮瓣移植至受者的腹股沟区,将供者的髂总动脉和髂腰静脉分别与受者的股动静脉吻合。实验分三组:正常大鼠组;改良手术组;旧术式组,即不剥离肌肉,将供者的腹主动脉与受者股动脉吻合。术后给予环孢素A。(2)雄性SD大鼠为供者,雌性SD大鼠为受者,进行改良手术,术后给予环孢素A。实验分三组:阳性组,即雄性大鼠组;阴性组,即雌性大鼠组;实验组,即进行改良手术。术后第28天取血,提取血液RNA,反转为cDNA,应用聚合酶连反应(polymerase chain reaction,PCR)检测雄性大鼠SRY基因。进行移植区域Micro-CT扫描并三维重建;(3)应用流式细胞仪,动态监测大鼠术后CD4+/CD8+T细胞的比值变化;通过酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immuno sorbent assay,ELISA)动态监测血清IL-2水平变化。结果:(1)成功建立一种可行的改良的带血管髂骨移植手术,动脉吻合时间24.7±2.3 min,静脉吻合时间33.0±1.6 min,缺血时间102.7.±3.5 min。(2)应用PCR技术,成功在接受雄性大鼠髂骨移植的雌性大鼠外周血中,检测出SRY基因;Micro-CT扫描后三维重建结果显示,移植髂骨骨密度降低。(3)动态监测外周血CD4+/CD8+T细胞的比值,和血清IL-2水平,发现产生嵌合状态的大鼠与正常大鼠相比,并无明显差异。结论:(1)通过剥离供者臀大肌,改变动脉吻合对象,可以建立相对简单、稳定的带血管髂骨移植动物模型。(2)大鼠移植髂骨骨密度降低。(3)通过免疫抑制剂的干预,使得术后大鼠免疫状态良好,并在无排斥反应发生的基础上,通过改良的带血管髂骨移植手术,建立了嵌合现象。
【关键词】：带血管髂骨移植 嵌合 动物模型
【学位授予单位】：第四军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R-332;R617
【目录】：

• 缩略语表6-8
• 中文摘要8-10
• 英文摘要10-13
• 前言13-14
• 文献回顾14-26
• 第一部分 带血管髂骨移植动物模型建立26-40
• 1.材料26-28
• 1.1 实验动物及饲养条件26
• 1.2 实验试剂和药品26
• 1.3 实验材料和设备26-27
• 1.4 液体配制27-28
• 2.实验方法28-35
• 2.1 实验分组28
• 2.2 带血管髂骨移植模型建立28-34
• 2.3 术后处理34
• 2.4 术后临床监测34-35
• 2.5 术后病理学检测35
• 2.6 统计学分析35
• 3.结果35-37
• 3.1 手术一般情况35-36
• 3.2 移植髂骨病理学检测36-37
• 4.讨论37-40
• 第二部分 术后嵌合现象检测及移植髂骨影像检测40-51
• 1.材料40-42
• 1.1 实验动物及饲养40
• 1.2 实验材料40
• 1.3 实验设备和仪器40-41
• 1.4 实验试剂和药品41
• 1.5 液体配制41-42
• 2.实验方法42-45
• 2.1 实验分组42
• 2.2 手术步骤和术后用药42-43
• 2.3 术后临床监测43
• 2.4 大鼠外周血嵌合状态检测43-45
• 2.5 产生嵌合现象大鼠移植部位Micro-CT扫描45
• 2.6 病理学检测45
• 3.结果45-48
• 3.1 术后一般情况45-46
• 3.2 PCR检测结果46-47
• 3.3 产生嵌合现象大鼠移植部位Micro-CT扫描结果47
• 3.4 移植髂骨病理检测结果47-48
• 4.讨论48-51
• 第三部分 术后CD4~+/CD8~+T细胞比值和IL-2 水平变化51-59
• 1.材料51-52
• 1.1 实验动物及饲养条件51
• 1.2 实验材料51
• 1.3 实验设备和仪器51
• 1.4 实验试剂和药品51-52
• 2.实验方法52-54
• 2.1 实验分组52
• 2.2 手术步骤和术后用药52
• 2.3 大鼠外周血CD4~+/CD8~+T细胞比值监测52-53
• 2.4 ELISA检测IL-2 水平53-54
• 2.5 统计学分析54
• 3.结果54-57
• 3.1 大鼠外周血CD4~+/CD8~+T细胞比值监测54-56
• 3.2 血清IL-2 监测变化56-57
• 4.讨论57-59
• 小结59-60
• 参考文献60-68
• 个人简历和研究成果68-69
• 致谢69

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