轮状病毒动物模型的构建及ZTR-68株灭活轮状病毒疫苗的体内保护性实验

发布时间：2020-03-19 23:06

【摘要】：轮状病毒(Rotavirus,RV)是引起五岁以下婴幼儿腹泻的主要病原之一,全球每年感染人数近1.1亿,病死数约为50万。至今,仍没有治疗轮状病毒感染的有效药物。疫苗接种是预防轮状病毒感染的有效手段。探究轮状病毒动物模型的构建,不仅有助于评价轮状病毒疫苗的保护性,也有助于研究轮状病毒导致腹泻的机制。本研究的目的旨在探究Balb/c乳鼠作为不同种属型别的轮状病毒动物模型的可靠性,在此基础上,评价RV灭活疫苗在小鼠模型中的保护作用。方法使用具有致病性的人源轮状病毒ZTR-68(G1[P8])株和实验室参考强毒株SA11(G3[2])分别感染Balb/c乳鼠(4d)。实验动物分为6组,ZTR-68与SA11各三个组,感染剂量为:ZTR-68高剂量组9X 106PFU/只,中剂量组6×106PFU/只及低剂量组3 ×106PFU/只;SA11高剂量组1×106PFU/只,中剂量组1×105PFU/只,低剂量组1×104PFU/只。经灌胃途径,依次感染。对照组灌胃同等剂量的PBS缓冲液。攻毒感染后1～7天对乳鼠进行各项指标的观察、收集、检测,以综合分析法评价动物模型的科学性和可靠性。在此基础上,使用ZTR-68毒株制备的灭活疫苗免疫动物后,观察检测评价疫苗的保护性效果。疫苗免疫动物分为160EU(酶标单位)、320EU和640EU三个剂量,经腹腔免疫2针,间隔2周。免疫后的成年鼠进行交配,待分娩后分别检测母鼠与乳鼠体内抗RV特异性抗体。对乳鼠用ZTR-68和SA11毒株攻毒进行保护性试验评价。结果:ZTR-68及SA11高、中剂量组均可以导致乳鼠发生明显腹泻及排 的毒,乳鼠攻毒24h后肠道即可见明显病变,于攻毒48h和72h后,乳鼠腹泻持续加重,肠道病变进一步加重。免疫疫苗组乳鼠,经灌胃攻毒后,腹泻发生延迟、腹泻程度降低,乳鼠粪便排毒量减少,肠道病变明显减轻。结论人源性RV ZTR-68毒株及猴源RV SA11株均可以用于Balb/c乳鼠动物模型的构建。ZTR-68株制备的灭活疫苗免疫母鼠后产生的抗体可良好的传递给子代乳鼠,传递于乳鼠的抗体不仅能够保护疫苗亲本株的攻击,也能保护SA11毒株的攻击,提示RV灭活疫苗诱导的抗体具有交叉保护作用。
【图文】：

逦中国医学科学院／北京协和医学院硕士研宄生学位论文逦逡逑引言逡逑人轮状病毒（Ｈｕｍａｎ邋Ｒｏｔａｖｉｒｕｓ，邋ＨＲＶ）自上世纪７０年代发现以来，至今仍是逡逑造成婴幼儿腹泻最主要的病原体之一［１］。每年全球感染轮状病毒的人数约为１．邋１亿，逡逑其中近２００万患者需要住院治疗，病死人数约６０万，还包括２４００万门诊病例［２］。逡逑发病及病死主要发生在低收入、经济欠发达、卫生条件欠好的国家，但感染率在发逡逑达国家与发展中国家没有明显差异［３］。轮状病毒属于呼肠孤病毒科，是一种双链ＲＮＡ逡逑病毒，病毒颗粒直径大约为７0？ｉ，呈二十面体结构，由３层衣壳蛋白构成［４］。轮状逡逑病毒分为８种，以英文字母编号为Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ与Ｈ，其中Ａ种最为常见，逡逑占感染轮状病毒腹泻病例的９０％以上［５］。ＲＶ基因组由１１节段的双链ＲＮＡ组成，编码逡逑６个结构蛋白（ＶＰＫ邋ＶＰ２、ＶＰ３、ＶＰ４、ＶＰ６和ＶＰ７）和６个非结构蛋白（ＮＳＰ１、ＮＳＰ２、逡逑ＮＳＰ３、ＮＳＰ４、ＮＳＰ５邋和邋ＮＳＰ６）（图邋１）邋［６］。逡逑Ｖｉｒｉｏｎ逦Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ邋ｐｒｏｔｅｉｒｔｓ逦Ｇｅｎｏｍｅ邋Ｎｏｎｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ逡逑

图２．邋ＮＳＰ４引起腹泻作用机理图示［１６］．逡逑病毒感染造成的疾病流行和诊治造成的经济压力己成为世界大生问题［１７］。由于目前没有针对轮状病毒感染的特效药物，接种疫感染的有效手段Ｍ。早在２００９年，世界卫生组织就倡议全球所疫苗纳入国家免疫规划中，以减少每年轮状病毒的感染及病死数［１用的轮状病毒疫苗均为口服减毒活疫苗（表１），包括Ｒｏｔａｒｉｘ？邋（Ｇｅｄ？邋（Ｇ１邋？Ｇ４，邋Ｐ［８］型）［２°］。自邋２００６邋年以来，两种活减毒邋ＲＶ邋疫苗（Ｒｏｔａ
【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R392

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本文编号：2590852