雌激素干预小鼠胰岛β细胞再生的机制研究

发布时间：2020-03-25 17:00

【摘要】：目的:17β-雌二醇(E2)是体内调节代谢的多功能类固醇激素。在本研究中,部分胰腺切除术(PPx)模型被用于研究E2在成年C57BL/6小鼠胰岛β细胞再生的作用,从而观察E2对胰岛β细胞功能的影响,阐明E2在胰岛β细胞增殖、分化及其功能成熟中的作用及分子调控机制。方法:将实验动物随机分成四组,包括假手术(Sham)组,模型(PPx)组,雌激素(E2)组和雌激素受体阻断剂(E2+ICI)组。进行胰腺切除术,切除胰腺的脾叶和肠系膜部分,保留胰腺十二指肠部,切除部分占胰腺总体积的65%,制备小鼠胰腺再生模型。Sham组小鼠只行剖腹手术。ELISA法检测血浆胰岛素水平;小鼠处死前进行葡萄糖耐量实验;处死动物后,荧光染色胰岛,计算胰岛的体积和数量;免疫组化法和免疫荧光法检测胰腺组织中细胞增殖抗原标记物Brd U和Ki67的表达;分离胰岛,进行葡萄糖刺激胰岛素分泌实验;蛋白质免疫印迹法检测FOXM1,Cyclin A2,Cyclin B1,Cyclin B2,Cyclin D2和Cyclin E2的蛋白表达水平;RT q PCR检测PDX-1,INS 1,INS 2,Cyclin A2,Cyclin B2,Cyclin D2,IL-1β,IL-6和TNFα的m RNA表达水平。结果:1.胰腺切除手术后7天,模型组小鼠血糖值明显升高,E2组较模型组下降(P0.05),E2的干预在降低了模型组小鼠持续增高的血糖水平(P0.05)。2.糖耐量实验结果显示,葡萄糖刺激120min后,Sham组的血糖值为91.2±17.3mg/dl,E2组血糖值回落到基线水平,较模型组相比下降明显[(145.5±24.5)vs(235.0±21.3)mg/dl mg/dl,P0.05]。GSIS结果发现,E2组在11.1mmol/L葡萄糖刺激下的胰岛素分泌量增加,粉碎胰岛后的胰岛素含量增加。3.胰腺组织的免疫荧光染色结果显示,与Sham组比较,模型组的胰岛体积增大,尤其是在E2处理后的胰岛体积增大更为明显(P0.05)。但胰岛数目在各实验组之间没有显著差异(P0.05)。4.免疫组化和免疫荧光法显示,Sham组胰岛内BrdU和Ki67阳性细胞数量非常少,模型组的胰岛内Brd U和Ki67阳性细胞数增多,E2组的Brd U和Ki67阳性细胞率较模型组显著增加,差异有统计学意义(P0.01)。5.Western bolt结果显示,与Sham组比较,E2组的FOXM1,Cyclin A2,Cyclin B1,Cyclin B2,Cyclin D2和Cyclin E2蛋白表达增加。RT q PCR检测发现,雌激素处理后,E2组的INS2,Cyclin A2,Cyclin B2的m RNA表达显著增加(P0.01)。结论:1.在胰腺切除诱导的胰腺再生过程中,雌激素的干预促使胰腺损伤后胰岛素分泌量增加,增强胰岛功能,从而降低糖尿病小鼠的血糖水平。2.E2治疗能有利于促进胰腺部分切除后的成年小鼠体内胰岛β细胞增殖,促使单个胰岛体积增大。3.胰腺切除诱导的胰腺再生模型中,E2能够促进胰岛β细胞增殖相关的细胞周期调控因子的表达,但对胰岛β细胞分化成熟相关的基因,如PDX-1和Ngn3没有影响,因此,胰岛β细胞的再生主要来自剩余胰岛β细胞的自我复制。
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R329.2

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本文编号：2600157