胰岛素抵抗对哮喘小鼠气道高反应性及气道炎症的影响

发布时间：2020-03-27 08:48

【摘要】：第一部分小鼠胰岛素抵抗-哮喘模型的建立与评估目的:建立C57BL/6J小鼠胰岛素抵抗-哮喘模型,并对该模型进行评估。方法:选取60只3周龄C57BL/6J小鼠常规饲养1周后随机分为两组,每组各30只,普食组小鼠给予普通饲料喂养,高脂组小鼠给予高脂饲料(D12492)喂养。所有小鼠均喂养至第6-14周,各组小鼠均检测空腹血糖(FBG)值、空腹血清胰岛素(FINS)值,并计算稳态模型胰岛素抵抗评价指数(HOMA-IR)评估胰岛素抵抗程度,HOMA-IR值2.5判定为胰岛素抵抗小鼠模型建立成功;将普食组小鼠随机分为正常对照组(HC)、哮喘组(NIRA);将高脂组已成功建立胰岛素抵抗的小鼠分别归入胰岛素抵抗组(IRNA)、胰岛素抵抗+哮喘组(IRA),其中NIRA组以及IRA组小鼠继续给予卵清蛋白(OVA)致敏、激发诱导哮喘模型,HC组和IRNA组小鼠给予生理盐水作为对照,末次激发24h后,制作肺病理切片,测定血清中抗OVA特异性Ig E及Ig G1水平,对各组小鼠胰岛素抵抗指数与哮喘评价指标进行评估。结果:1、实验至第9周末,高脂组小鼠均成功建立胰岛素抵抗模型;2、NIRA组、IRA组小鼠出现明显炎症肺组织病理损害,IRA组炎症细胞浸润更明显;3、NIRA、IRA组小鼠血清中OVA特异性Ig E、Ig G1水平明显高于HC、IRNA组小鼠(P0.01);IRA组小鼠血清中Ig E、Ig G1水平均高于NIRA组(P0.05);结论:采用高脂饲料(D12492)喂养C57BL/6J小鼠9周,可建立稳定的胰岛素抵抗小鼠模型,在此基础上用OVA诱导可成功建立胰岛素抵抗-哮喘模型,且肥胖不一定都伴随胰岛素抵抗,肥胖持续的时间和程度是关键因素。本实验方法建立的胰岛素抵抗-哮喘小鼠模型稳定,经济成本低,具有较强的实用性和操作性。第二部分胰岛素抵抗对哮喘小鼠气道高反应性及气道炎症的影响目的:探究胰岛素抵抗对哮喘小鼠气道高反应性(AHR)及气道炎症的影响。方法:选取60只3周龄C57BL/6J小鼠常规饲养后按照第一部分建模方法建立胰岛素抵抗-哮喘模型,并在末次激发24h内,每组随机选取5只小鼠依次雾化吸入浓度为0、3、6、12、25、50、100 mg/ml Mch,间隔2 min,测定小鼠气道总阻力(Rrs)。末次激发24h后,采取摘除眼球法收集小鼠血液后,进行支气管肺泡灌洗,收集各组小鼠肺泡灌洗液,计数BALF中白细胞总数及分类,并检测BALF和血清中相关炎症因子的水平,分析各组小鼠气道高反应性及炎症因子变化情况。结果:1、随着雾化吸入Mch浓度的增加,HC组、IRNA组小鼠气道阻力没有明显变化;与HC组相比,NIRA组、IRA组小鼠气道阻力逐渐增高(P0.05);与NIRA组相比,IRA组小鼠气道阻力升高更明显(P0.05)。2、NIRA、IRA组小鼠BALF中白细胞总数明显多于HC、IRNA组小鼠(P0.01),且IRA组小鼠白细胞总数多于NIRA组(P0.01);3、NIRA、IRA组小鼠BALF与血清中IL-4、IL-17水平明显高于HC、IRNA组小鼠(P0.01),而INF-γ的浓度明显降低(P0.05);IRA组小鼠BALF与血清中IL-4、IL-17水平均高于NIRA组(P0.05),INF-γ的浓度明显低于NIRA组(P0.05)。结论:1、胰岛素抵抗可以增加哮喘小鼠气道阻力,使小鼠气道高反应性增加,从而加重哮喘;2、胰岛素抵抗促进OVA诱导的哮喘小鼠模型中炎症因子IL-4、IL-17的浓度增加,而使IFN-γ浓度降低,使气道炎症加重,进而加重哮喘。
【图文】：

生理盐水 20ml现用现配1%OVA 雾化液 卵清蛋白 20mg生理盐水 20ml现用现配（1）普通饲料：脂肪 10%，蛋白质 24%，碳水化合物 66%，总热量为 348kc（2）高脂饲料：脂肪 60%，碳水化合物 20%，蛋白质 20%，总热量为 524kc2 方法2.1 建立胰岛素抵抗小鼠模型适应性喂养 1 周后，60 只 3 周龄 C57BL/6J 小鼠，按随机数字表法分为高脂组，每组各 30 只。具体操作步骤如图所示（见图 1-1）。

7）将 100μl 的终止液加入每孔，充分混匀。8）用酶标仪于 30min 内在 450nm 处检测吸光值。9）记录检测数据，根据公式求得待测样品的浓度。根据稳态模型胰岛素抵抗指数 (HOMA-IR)=FBG（mmol/l）×FI行计算，HOMA-IR 指数越高，代表 IR 程度越重。(HOMA-IR)>2功。.2 建立胰岛素抵抗-哮喘模型.2.1 致敏将普食组小鼠随机分为正常对照组（HC）、哮喘组(NIRA)；将高小鼠分别随机归入胰岛素抵抗组（IRNA)、胰岛素抵抗+哮喘组(IR体操作步骤如图所示(见图 1-2)。
【学位授予单位】：中国人民解放军空军军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R725.6;R-332

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本文编号：2602729