人巨细胞病毒利用干扰素诱导跨膜蛋白促进病毒组装中心形成

发布时间：2017-03-22 02:01

  本文关键词：人巨细胞病毒利用干扰素诱导跨膜蛋白促进病毒组装中心形成，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：干扰素诱导跨膜蛋白(interferon-induced transmembrane proteins,IFITMs)已经被鉴定为宿主I型干扰素防御系统中的关键效应分子。大多数RNA病毒对宿主细胞的入侵阶段被IFITMs所抑制。然而,在DNA病毒感染过程中IFITMs所发挥的作用尚待深入研究。在本论文中,我们发现人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV),一类大分子双链DNA病毒,在感染人成纤维细胞过程中利用IFITMs以促进病毒组装中心(virion assembly compartment,v AC)的形成。实验表明IFITMs在人胚肺成纤维细胞系(MRC5)中组成型表达,而HCMV感染晚期抑制了IFITM蛋白的累积;在MRC5细胞中过表达IFITM蛋白能够促进HCMV复制3-5倍,而利用RNA干扰(RNAi)抑制IFITM蛋白的表达后,巨细胞病毒的复制在第8天降低约100倍;RNA干扰下调IFITMs并未影响到巨细胞病毒DNA复制和基因表达,但病毒组装中心(v AC)的典型球状结构却不能形成,我们同时利用电镜验证了在IFITM敲低的细胞中病毒病毒颗粒组装缺陷,并产生感染性较弱的病毒颗粒。有趣的是,单纯疱疹病毒,一种与HCMV密切相关的人类疱疹病毒,其在MRC5细胞中的复制在IFITMs蛋白下调后却不受影响。这些结果表明IFITMs特异地参与了HCMV复制所必需的信号通路。
【关键词】：HCMV HSV-1 成纤维细胞 IFITMs RNAi vAC
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R373.11
【目录】：

• 中文摘要4-5
• Abstract5-8
• 前言8-10
• 第一部分 IFITMS在人巨细胞病毒感染中的作用10-24
• 一、材料与方法10-15
• 1.1 质粒和试剂10
• 1.2 病毒和细胞系10-11
• 1.3 SHRNA敲低11
• 1.4 病毒生长分析11
• 1.5 WESTERN印迹11-13
• 1.6 免疫荧光13
• 1.7 DNA和RNA的分析13-15
• 二、结果15-22
• 2.1 HCMV感染抑制IFITM基因表达15-19
• 2.2 人体成纤维细胞IFITM过表达无法抑制HCMV复制19-20
• 2.3 IFITMS的RNAI敲低抑制HCMV复制但不抑制HSV复制20-22
• 三、讨论22-24
• 第二部分 IFITMS促进HCMV病毒组装中心的形成24-37
• 一、材料与方法24-26
• 1.1 质粒和试剂24
• 1.2 HCMV病毒纯化24-25
• 1.3 电镜分析25-26
• 二、结果26-34
• 2.1 下调IFITMs蛋白不影响HCMV基因表达和DNA的合成，但降低了病毒感染性26-28
• 2.2 IFITM是病毒正确形成vAC所必需28-31
• 2.3 通过电子显微镜超微结构分析揭示IFITM敲低后病毒组装发生缺陷31-34
• 三、讨论34-37
• 参考文献37-44
• 综述44-56
• 参考文献51-56
• 附录56-57
• 攻读学位期间发表文章57-58
• 致谢58-59

【共引文献】

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本文编号：260653