载脂蛋白M通过B类Ⅰ型清道夫受体上调24-脱氢胆固醇还原酶发挥抗氧化应激作用

发布时间：2020-04-04 23:24

【摘要】：目的:载脂蛋白M(apoM)是高密度脂蛋白(HDL)的组成部分之一,且前期研究表明apoM可能通过24-脱氢胆固醇还原酶(DHCR24)途径抑制TNF-α诱导的白细胞介素-1β(IL-1β)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的表达。本研究旨在探究apoM是否通过DHCR24途径发挥抗炎作用。方法:(1)应用阴性对照慢病毒和携带apoM基因的慢病毒分别转染EA.hy926细胞。获得稳定表达apoM的细胞株后提取总RNA和蛋白,检测携带apoM基因的慢病毒感染的EA.hy926细胞(apoM~(Tg)细胞)和阴性对照慢病毒感染的EA.hy926细胞(apoM~(TgN)细胞)中apoM mRNA与蛋白表达水平。(2)将病毒转染后的apoM~(TgN)细胞和apoM~(Tg)细胞传代培养,并各以6×10~6个/ml的密度均匀铺入两块六孔板中(即对照组与实验组),待细胞完全贴壁后,对照组与实验组中分别加入PBS与10ng/ml的TNF-α处理3h、6h,均提取总RNA检测B类Ⅰ型清道夫受体(SR-B1)、DHCR24以及IL-1β、MCP-1的mRNA表达水平。(3)将病毒转染后的apoM~(TgN)细胞和apoM~(Tg)细胞传代培养,并各以6×10~6个/ml的密度均匀铺入四块六孔板中(即对照组A、B与实验组C、D),待细胞完全贴壁后,对照组A、实验组C与对照组B、实验组D中分别加入无水乙醇与10 uM的BLT-1(SR-B1抑制剂)处理12h,然后在所有的对照组与实验组中均加入10 ng/ml的TNF-α处理6h,均提取总RNA检测DHCR24、IL-1β、MCP-1的mRNA表达水平。结果:(1)apoM~(Tg)细胞中apoM mRNA和蛋白表达水平显著高于apoM~(TgN)细胞。(2)生理情况下或炎症刺激作用下,apoM~(Tg)细胞中SR-B1、DHCR24 mRNA表达水平显著高于apoM~(TgN)细胞;生理情况下,apoM~(Tg)细胞与apoM~(TgN)细胞的IL-1β、MCP-1的mRNA表达水平无统计学意义;炎症刺激作用下,apoM~(Tg)细胞中IL-1β、MCP-1的mRNA表达水平显著低于apoM~(TgN)细胞。(3)apoM~(Tg)细胞中DHCR24 mRNA表达水平显著高于apoM~(TgN)细胞;apoM~(Tg)细胞经BLT-1处理12后,DHCR24 mRNA表达水平显著下降,而IL-1β、MCP-1的mRNA表达水平并无统计学意义。结论:apoM能显著增加SR-B1和DHCR24的表达,并且通过SR-B1受体上调DHCR24的表达,然而并非通过该途径抑制TNF-α诱导的IL-1β、MCP-1的表达,即apoM可能通过其他途径发挥其抗炎作用。apoM可通过SR-B1上调DHCR24发挥抗氧化应激作用。
【图文】：

1.EA.hy926 细胞过表达 ApoM 在生理情况或炎症刺激条件下对 SR-B1、DHCR24 mRNA 表达水平的影响应用阴性对照慢病毒和携带 apoM 基因的慢病毒分别转染 EA.hy926 细胞（购自上海中科院细胞库）（图 1），其是一种人脐静脉内皮融合细胞，它是在聚乙二醇（PEG）作用下，将原代人脐静脉细胞和 A549 细胞（人肺癌细胞株）融合，使其能无限传代。获得稳定表达 ApoM 的细胞株后提取总 RNA 与总蛋白，检测携带 apoM 基因的慢病毒感染的 EA.hy926 细胞（apoMTg细胞）和阴性对照慢病毒感染的 EA.hy926 细胞（apoMTgN细胞）中 ApoM mRNA 与蛋白表达水平（图 2）。将 apoMTgN细胞和 apoMTg细胞传代培养，并各以 6×106个/ml 的密度均匀铺入两块六孔板中（即对照组与实验组），待细胞完全贴壁后，对照组与实验组中分别加入 PBS 与 10ng/ml 的 TNF-α 处理 6h，均提取总 RNA 检测 SR-B1、DHCR24 的表达水平（图 3）。

图 2. apoMTgN细胞与 apoMTg细胞中 ApoM mRNA 与蛋白表达水平注：EA.hy926 细胞经病毒转染后 apoMTg细胞较 apoMTgN细胞显著过表达 Apo蛋白（左），apoMTg细胞较 apoMTgN细胞显著高表达 ApoM mRNA（右），具有显统计学意义（n=6，，****p<0.0001）。
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R346

【参考文献】

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1 王灿灿;王U

本文编号：2614197