白色念珠菌Iqg1p的功能分析

发布时间：2020-04-14 04:49

【摘要】：白色念珠菌是一种广泛存在的条件致病性真菌,它主要以单细胞的孢子体、多细胞的菌丝体及假菌丝体三种形态存在。白色念珠菌感染会引发念珠菌病,根据感染位置的不同,可分为皮肤念珠菌病、口腔念珠菌病、脚气病及阴道炎等。此外,白色念珠菌的深部感染具有致命性,造成的致死率逐年增高,它已经成为威胁人类健康的一种重要病原菌。因此对于白色念珠菌生物分子机理的研究有利于人们更好地理解它的致病机制,也有利于进一步解决白色念珠菌感染给人类带来的困扰。IQGAPs是一类普遍存在于真核生物中的支架蛋白家族,它们具有很高的保守性,能够与许多蛋白质发生相互作用,并参与到不同的细胞过程,包括胞质分裂、细胞迁移等。白色念珠菌Iqg1p是IQGAPs蛋白家族中重要的一员,它具有CH、IQ、GAP、GAPC四个功能区段,通过辅助蛋白激酶及磷酸酶与它们各自的底物结合而起作用。为了深入了解Iqg1p的功能,本研究对白色念珠菌Iqg1p的4个功能区段进行了区段敲除实验,研究发现Iqg1p的N-端两个功能域CH和IQ对于细胞的形态没有重要的作用,这两个区段敲除以后细胞形态没有太大的缺陷;而Iqg1p的C-端两个功能域GAP和GAPC对于细胞的形态发生则具有非常大的意义,这两个区段敲除以后,细胞无法正常分裂,形成成串的多核假菌丝体。此外,对于区段敲除缺陷菌株进行菌丝诱导,发现在不同的诱导培养基中,各区段敲除菌形成菌丝的能力不同,菌丝的缺陷程度也各异。通过离体蛋白结合实验,本研究检测出Iqg1p的GAP功能区段与Cdc42p及Rho1p具有很强的相互作用。为了进一步探讨它们之间在功能上是否相互作用,本研究通过点突变技术构建了 Rho1p、Cdc42p的过表达突变体,即将Cdc42p第61位谷氨酰胺突变成亮氨酸得到Cdc42Q61L,将Rho1p第67位谷氨酰胺突变成亮氨酸得到Rho1Q67L,使Rho1p、Cdc42p—直处于激活状态,结果表明Cdc42Q61L和Rho1Q67L可以部分恢复iqg1关闭菌的形态缺陷,显著提高了 iqg1关闭菌在42℃高温条件下的生长能力。这些结果表明Iqg1p与Rho1p、Cdc42p在功能上也相互影响,进一步验证了离体蛋白结合实验的结果。此外,尝试用结构生物学方法解析Iqg1p各功能区段的空间结构。这些结果为深刻认识Iqg1p在白色念珠菌细胞生物学过程中的功能意义具有很大的促进作用。
【学位授予单位】：安徽大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R379.4

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本文编号：2626898