脑选择性深、低体温停循环对大鼠海马区miRNA表达变化的研究

发布时间：2020-04-23 12:08

【摘要】：[目的]建立大鼠深、低体温停循环模型,提取脑组织海马区miRNA,在miRNA水平讨深低温对脑保护的机制。[方法]选用昆明医科大学动物实验室提供的健康成年清洁级(Sprague-Dawley,SD)大鼠28只,体重410-620g左右,雌雄不限。随机分为3组,每组6只,分别为常温停循环组(NTCA)、亚低温循环组(HCA)、深低温循环组(DHCA),5只作为体外循环预冲液的配置,其余5只为假手术组(不停循环)。具体操作如下:常温停循环(NTCA)组:体外循环建立成功后,通过可调节温度的水箱维持其肛温(36.8℃-37℃)下体外循环10min,再停循环10min。亚低温停循环(HCA)组:体外循环建立成功后,通过变温水箱、冰袋、冰屑等降温手段使大鼠肛温迅速降至≤28℃下体外循环(Cardiopulmonary bypass,CPB)10min,维持此温度再停循环10min。深低温停循环(DHCA)组:体外循环建立成功后,通过变温水箱、冰袋、冰屑等降温手段使大鼠肛温迅速降至≤20℃下CPB1Omin,维持在此温度下再停循环10min。然后快速断头提取脑组织,分离大鼠海马标本提取总RNA,利用基因芯片技术及Q-PCR技术检测miRNA的表达变化情况,实验数据运用SPSS19.0软件进行分析。[结果]深低温循环组内海马区一共有38个miRNAs表达改变,其中有14 个表达差异明显,包括 rno-miR-34c-5p、rno-miR-493-3p、rno-miR-204-3p、rno-miR-183-5p、rno-miR-204-5p、rno-miR-448-5p、rno-miR-764-5p、rno-miR-1298、rno-miR-448-3p、rno-miR-182、rno-miR-497-5P、rno-let-7c-5a 等,对这些 miRNAs 靶点的预测分析揭示DHCA的生理过程涉及多个靶点参与和生物学功能。[结论]DHCA后脑损伤涉及到一系列miRNAs的表达的变化,可为深低温停循环脑损伤的机制提供新的科学依据及研究方向。
【图文】：

屑等降温手段使大鼠肛温迅速降至夕0°Ｃ下ＣＰＢｌＯｍｉｍ维持此温度再停循环ｌＯｍｉｎ。逡逑１－４－６标本提取逡逑三组标本停循环ｌＯｍｉｎ后，迅速断头打开颅骨，据大鼠脑解剖图（图２）对脑组逡逑织定位，通过骈胝体切断左右两侧大脑半球，分离颞叶后显露海马组织逡逑（图３），显微镊夹取海马组织，放入做好标记的冻存管保存于－８０°Ｃ恒温冰箱。脑组织逡逑在常温下能耐受的缺血缺氧安全时间窗为５－８ｍｉｎ，，本实验中我们选择停循环ｌＯｍｉｎ，逡逑ｌＯｍｉｎ的时限已经超过了常温下脑组织缺血的耐受时间极限，并且海马组织作为脑缺血逡逑缺氧最敏感部位，因此以这个缺血缺氧时间的海马组织进行研究更具有可比性、差异性，逡逑对探讨缺血性脑损伤早期的发病机理和研究更具有价值。逡逑：＾邋；＼Ｍ邋１％邋ｉ邋？逡逑＾逦４邋——悐？逦？逡逑图２大鼠脑海马解剖直视图逦图３大鼠海马组织逡逑１－５数据统计分析逡逑实验结果数据应用ＳＰＳＳ邋ＳｔａｔｉｓｔｉｃｓＶ１９．０统计软件包进行处理，统计量以均数士标准逡逑差（又±ｓ）表示，根据实验资料及要求，两组间比较用独立样本ｔ检验，三组及组的以逡逑上组件比较用单因素方差分析并行组间比较

三组标本停循环ｌＯｍｉｎ后，迅速断头打开颅骨，据大鼠脑解剖图（图２）对脑组逡逑织定位，通过骈胝体切断左右两侧大脑半球，分离颞叶后显露海马组织逡逑（图３），显微镊夹取海马组织，放入做好标记的冻存管保存于－８０°Ｃ恒温冰箱。脑组织逡逑在常温下能耐受的缺血缺氧安全时间窗为５－８ｍｉｎ，本实验中我们选择停循环ｌＯｍｉｎ，逡逑ｌＯｍｉｎ的时限已经超过了常温下脑组织缺血的耐受时间极限，并且海马组织作为脑缺血逡逑缺氧最敏感部位，因此以这个缺血缺氧时间的海马组织进行研究更具有可比性、差异性，逡逑对探讨缺血性脑损伤早期的发病机理和研究更具有价值。逡逑：＾邋；＼Ｍ邋１％邋ｉ邋？逡逑＾逦４邋——悐？逦？逡逑图２大鼠脑海马解剖直视图逦图３大鼠海马组织逡逑１－５数据统计分析逡逑实验结果数据应用ＳＰＳＳ邋ＳｔａｔｉｓｔｉｃｓＶ１９．０统计软件包进行处理，统计量以均数士标准逡逑差（又±ｓ）表示，根据实验资料及要求，两组间比较用独立样本ｔ检验，三组及组的以逡逑上组件比较用单因素方差分析并行组间比较，若实验差异有统计学意义，在运用ＬＳＤ－ｔ逡逑进行组间的两两比较，Ｐ＜0．0５有统计学意义。逡逑１３逡逑
【学位授予单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R338

【参考文献】

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本文编号：2637709