小鼠肿瘤移植重建过程中MDSCs细胞抗凋亡机理的研究

发布时间：2020-04-24 00:01

【摘要】：近年来恶性肿瘤免疫治疗疗效显著,但机体免疫系统中各免疫细胞亚群的相互干扰是限制肿瘤免疫治疗效果的关键因素,因此从多个途径对免疫系统进行干预,是癌症免疫疗法的新思路。骨髓来源的抑制性细胞(Myeloid-derived suppressor cells,MDSCs),是免疫抑制细胞成员中生物学功能复杂的重要的亚群,MDSCs能在恶性肿瘤患者体内迅速积累,抑制免疫效应细胞发挥免疫功能,帮助恶性肿瘤细胞免疫逃逸,而且与乳腺癌患者预后不良密切相关,但是由于MDSCs在恶性肿瘤患者体内的积聚机制尚不明晰,从而限制了针对肿瘤相关MDSCs靶向药物的研发。本研究以4T1细胞系构建小鼠乳腺癌模型。通过流式细胞术检测小鼠肿瘤移植重建过程中脾脏免疫细胞亚群比例以及数量的变化。利用密度梯度离心法分离小鼠脾脏MDSCs细胞亚群。使用RT-PCR和Western blot技术筛选荷瘤鼠MDSCs与淋巴细胞差异基因和蛋白。结果表明,荷瘤小鼠脾脏MDSCs细胞亚群比例(53.7±3.7 vs 3.2±0.8)%和绝对数量(57±5.8 vs 0.31±0.01)×10~7显著增加,淋巴细胞亚群比例(53.7±3.7 vs 3.2±0.8)%显著降低,绝对细胞数量显著增加。密度为1.084g/m~3的OptiPrep~(TM)分离液,在800g离心力下离心30min后,分离液上层淋巴细胞比例为(62.5±3.2)%,分离液下层MDSCs细胞比例为(71.7±4.2)%。(3)在健康小鼠脾脏免疫细胞分离过程中,B220~+细胞富集在分离液上层(53.2±4.6)%,CD3~+T富集在分离液下层(75.3±7.6)%。4T1小鼠脾脏MDSC中高表达Cyclin E、STAT3、Bcl-2,而淋巴细胞高表达Caspase 3、Cleaved-PARP。小鼠肿瘤移植重建过程中脾脏MDSCs细胞Cyclin E、STAT3、Bcl-2表达量高于淋巴细胞,Caspase 3、Cleaved-PARP表达量低于淋巴细胞。
【图文】：

麻醉剂,用量,麻醉效果,小鼠

轻轻向上提起，用剪刀贴着表剥离下来，将得到的肿瘤块放入倒有 PB，取出小鼠脾脏与肝（注意动作轻柔，保持向下取出小鼠的肺（保持完整），将得到器官raphpad Prism 统计软件进行制图分析，数-wayANOVA 分析，组间两两比较采用 SN0.01 为差异极显著。剂麻醉效果药后，在合适的剂量（1.6-2.2mg/20g）范会加长；但低于 1.6 mg / 20 g 时麻醉效果心跳加速、四肢疲软；而高剂量（高于 2果，可得出 20 g 的小鼠最佳麻醉剂剂量为小鼠手术时间约为 70 min，手术时间充足

表型,器官

沈阳农业大学硕士学位论文 2 天测量小鼠肿瘤体积大小一次，，每隔 7 天解剖一部分小鼠（5 只每组），称量器官。随着移植后肿瘤细胞在小鼠体内的增殖，第四与第五乳腺之间的淋巴结逐渐肿大且毛细血管密度显著增加，7 天后出现明显的肿瘤肿块，前 15 天肿瘤体积以及肿瘤增长缓慢，15 天之后肿瘤体积及重量迅速增长；脾脏的体积以及重量也随着肿瘤细增殖而增长，并且脾脏重量的增长速率与肿瘤重量在前 30 天内，呈正相关（结果 1 A、B、C 所示）；肺脏以及肝脏的体积以及重量随着肿瘤的发生发展并没有显著化。值得注意的是，本试验所使用的小鼠肿瘤模型在移植 4T1 细胞 30 天后，肿瘤出现转移，随着时间的增加，转移部位逐渐增加，乳腺、肺、肾脏、胸腔膜是最常转移部位；肝脏以及脾脏转移现象比较少见，多出现在小鼠肿瘤长度至 2cm 左右，病变区特征为组织呈灰白色，且与正常组织界限分明。如图 1D 所示。
【学位授予单位】：沈阳农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R730.51;R-332

【参考文献】