白纹伊蚊唾液腺C-型凝集素2的原核表达与组织表达特性

发布时间：2017-03-23 13:07

  本文关键词：白纹伊蚊唾液腺C-型凝集素2的原核表达与组织表达特性，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的克隆并表达白纹伊蚊唾液腺C-型凝集素2(C-type lectin2,CTL2)蛋白。方法根据白纹伊蚊(罗马株)C-型凝集素2开放读码框序列(Aalb_CTL2)(Gen Bank:AY826069.1),设计特异引物采用RT-PCR技术从白纹伊蚊广州株雌蚊体内扩增获得Aalb_CTL2基因。利用美国国家生物技术信息中心(NCBI)、瑞士生物信息学研究所的蛋白分析专家系统(Ex PASy),结合其他生物信息学分析软件包,分析预测该蛋白质的结构功能;进而将其克隆到原核表达质粒p ET-28a(+)中,重组质粒在大肠杆菌Rosetta/DE3中经异丙硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导表达,SDS-PAGE电泳分析表达结果,表达产物采用Ni-NTA-Agarose柱进行纯化。最后采用western blotting方法验证所获得重组表达蛋白;同时采用real-time RT-PCR技术构建Aalb_CTL2唾液腺、中肠、脂肪体不同组织表达谱。结果1.成功克隆得Aalb_CTL2基因,全长456bp,编码151个氨基酸,理论分子量为17335Da,等电点为9.03。重组质粒经PCR、双酶切及测序表明p ET-28a(+)-Aalb_CTL2重组质粒原核表达体系成功构建;SDS-PAGE分析结果显示,重组质粒在Rosetta/DE3获得高效表达,主要以包涵体形式存在。Western blotting结果显示重组蛋白可被抗6-His tag抗体识别。重组蛋白经变性、复性、Ni-NTA-Agarose柱层析后获得单一的重组蛋白。2.组织表达谱显示Aalb_CTL2在雌蚊唾液腺表达水平显著高于在中肠和脂肪体中(P0.05)。结论1.成功构建p ET-28a(+)-Aalb_CTL2重组原核表达质粒并表达出融合Aalb_CTL2蛋白。2.Aalb_CTL2在雌蚊唾液腺特异高表达。
【关键词】：唾液腺 白纹伊蚊 C型凝集素2 原核表达
【学位授予单位】：贵阳医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R384.1
【目录】：

• 中文摘要4-5
• 英文摘要5-8
• 略缩词表8-10
• 引言10-12
• 材料与方法12-28
• 结果28-37
• 讨论37-39
• 结论39-40
• 参考文献40-44
• 综述44-56
• 参考文献52-56
• 作者简历56-57
• 致谢57-58
• 学位论文数据集58

【参考文献】

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1 吴家红;程金芝;孙宇;陈璐;;白纹伊蚊基因表达定量PCR内参基因的选择[J];中国人兽共患病学报;2011年05期

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本文编号：263778