江苏省HFMD病原谱研究及柯萨奇B3疫苗评价小鼠模型的初步建立

发布时间：2017-03-23 20:14

  本文关键词：江苏省HFMD病原谱研究及柯萨奇B3疫苗评价小鼠模型的初步建立，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：手足口病(Hand,foot and mouth disease,HFMD)是一种婴幼儿人群常见的急性传染病,近年来在世界范围特别是亚太地区广泛流行。肠道病毒(Enterovirus,EV)为引起HFMD的主要病原体,其中人类肠道病毒71型(Enterovirus A71,EV-A71)和柯萨奇病毒A组16型(Coxsackievirus A16,CV-A16)因引发多个国家或地区的HFMD暴发而受到广泛关注。然而HFMD病原谱以及主要病原的疫苗学研究仍存在诸多亟需解决的问题,主要表现为:1.目前缺乏HFMD发病率和基于发病率的病原谱资料,阐明HFMD发病率及病原谱对评估HFMD的疾病负担,针对性的研发疫苗具有重要意义;2.肠道病毒的遗传物质在流行中易发生变异,导致流行毒株及其引发的HFMD症状的复杂性,因此需明确EV-A71/CV-A16以及其他肠道病毒的分子流行特征,以确定有效的疫苗株;3.EV-B组病毒除引起HFMD外,易导致病毒性心肌炎、脑炎等重症疾病,目前尚无针对CV-B组特别是CV-B3的疫苗,开展CV-B3动物模型和疫苗研究,可为研发防控病毒性心肌炎疫苗提供数据。针对上述HFMD病原学以及CV-B3的疫苗学研究方面存在的问题,本研究采用主动监测和病例报告结合的方法对江苏省HFMD的发病率和病原谱进行研究,同时分析HFMD主要病原的分子流行特征,初步建立CV-B3动物模型,开展了灭活疫苗免疫保护效果研究。1.对江苏省EV-A71疫苗Ⅲ期临床9442例对象进行为期两年的前瞻性队列研究,采用主动监测方法获得了2012-2013年该人群中HFMD的发病率为150.9/1000人年,前5位发病率(1000人年)的肠道病毒依次为CV-A16(54.5)、CV-B3(14.2)、CV-A10(8.5)、EV-A71(5.9)和CV-A6(5.7);2012-2013年该人群HFMD病原谱为CV-A16(36.1%)、CV-B3(9.3%)、CV-A10(5.6%)、CV-A6(3.7%)、E9(3.1%)、EV-A71(2.2%)、CV-A2/CV-A12/CV-A22/CV-A14/E16(1.9%)、CV-A8/CV-A9/E3/E11/E24(1.2%)、CV-A1/CV-A4/CV-B5/CV-A21/E6/E18/E19(0.6%)、未分型肠道病毒(8.6%)和非肠道病毒(25.0%)。2.采用病例报告研究获得2013-2014年该人群中HFMD的发病率为29.9/1000人年,前5位发病率(1000人年)的肠道病毒依次为EV-A71(4.2)、CV-A16(1.2)、CV-A22(1.1)、CV-A6(0.9)和CV-A24(0.7)。2013-2014年该人群HFM D病原谱:EV-A71(14.2%)、CV-A16(3.9%)、CV-A22(3.5%)、CV-A6(2.8%)、CV-A24(2.5%)、CV-A10/CV-B3/E6(2.1%)、CV-B5(1.8%)、E9(1.4%)、CV-A9/CV-B4(1.1%)、CV-B2/E1/E11(0.7%)、CV-A1/CV-A2/CV-A20/E3/E7/E15/E16/E21/E25/EV-B69/EV-C99(0.4%)、未分型肠道病毒(6.4%)和非肠道病毒(51.8%)。应用二代测序在肠道病毒阴性病例标本中检测到阳性率较高的链球菌和人类疱疹病毒5型,在HFMD病原谱中构成比分别为27.9%和47.8%。3.对两年间引起HFMD的主要肠道病毒进行分离和序列分析,获得EV-A71、CV-A16、CV-A6等毒株的分子进化特征:2012-2014年间EV-A71毒株为C4a亚型不同分支毒株共流行;两年间流行的CV-A16毒株分别属于B2a亚型不同分支;2012年CV-A6毒株为F2和F3亚型共流行,而2013年主要流行F3亚型毒株;2012年流行的CV-A10毒株属于基因型C和D;2012年流行的CV-B3毒株属于D2亚型不同分支。4.应用分离的CV-B3强毒株(286/CV-B3),初步建立了疫苗评价用小鼠模型,并利用该模型对制备的CV-B3灭活疫苗的保护效果进行评价。结果显示灭活疫苗免疫的小鼠在应用强毒株286/CV-B3攻毒时,呈现较好的保护效果。综上所述,本研究获得了2012-2014年江苏省婴幼儿人群HFMD的发病率和病原谱,提出HFMD多价疫苗应包括病原谱中比例较高且危害较大的CV-B3和CV-A6。为解决CV-B3疫苗研究中存在的瓶颈,初步建立了CV-B3疫苗评价的小鼠动物模型,并对CV-B3灭活疫苗保护效果进行了研究,为HFMD的防控以及CV-B3疫苗研发提供了依据和工具。
【关键词】：手足口病 肠道病毒 病原谱 发病率 疫苗 柯萨奇病毒B组3型
【学位授予单位】：中国食品药品检定研究院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R-332;R392
【目录】：

• 中文摘要7-9
• Abstract9-11
• 前言11-17
• 一、HFMD肠道病毒病原谱研究现状11-14
• 1 HFMD肠道病毒病原谱概况11-13
• 1.1 EV-A组病毒与HFMD11-12
• 1.2 EV-B组病毒与HFMD12-13
• 1.3 EV-C组病毒与HFMD13
• 2 HFMD肠道病毒病原谱和主要病原分子流行特征相关研究存在的问题13-14
• 二、HFMD肠道病毒疫苗研究现状14-15
• 1 非EV-A71/CV-A16 肠道病毒疫苗研究现状14
• 2 HFMD肠道病毒疫苗研究存在的问题14-15
• 三、本研究的目的、意义及技术路线15-17
• 1 目的和意义15-16
• 2 主要技术路线16-17
• 第一部分 江苏省 2012-2014 年HFMD病原谱研究17-32
• 引言17
• 一、江苏省 2012-2013 年HFMD病原谱主动监测研究17-25
• 1.1 仪器与耗材17-18
• 1.2 试剂18
• 1.3 引物列表18
• 1.4 实验材料来源18-19
• 1.5 实验方法19-21
• 1.6 结果21-23
• 1.6.1 2012-2013 年江苏省三地HFMD流行情况21
• 1.6.2 非EV-A71/CV-A16 肠道病毒样本检测结果21-22
• 1.6.3 59 例非EV-A71/CV-A16 肠道病毒感染病例病原谱组成22-23
• 1.6.4 临床症状及病程23
• 1.7 讨论23-25
• 二、江苏省 2013-2014 年HFMD病原谱病例报告研究25-31
• 2.1 仪器与耗材25
• 2.2 试剂25
• 2.3 引物列表25
• 2.4 实验材料来源25
• 2.5 实验方法25-26
• 2.6 结果26-29
• 2.6.1 2013-2014 年江苏省三地HFMD流行情况26
• 2.6.2 非EV-A71/CV-A16 肠道病毒样本检测结果26-28
• 2.6.3 肠道病毒阴性样本的二代测序检测结果28
• 2.6.4 两年监测期发病率和病原谱比较分析结果28-29
• 2.7 讨论29-31
• 小结31-32
• 第二部分 江苏省 2012-2014 年HFMD主要病原分子流行特征研究32-58
• 引言32-33
• 一、病原分离33-37
• 1.1 仪器与耗材33-34
• 1.2 试剂34
• 1.3 材料34-35
• 1.4 方法35-36
• 1.5 结果36-37
• 二、主要病原的分子流行特征研究37-57
• 2.1 EV-A7137-43
• 2.2 CV-A1643-46
• 2.3 CV-A646-49
• 2.4 CV-A1049-52
• 2.5 CV-B352-57
• 小结57-58
• 第三部分CV-B3 疫苗动物模型的初步建立与灭活疫苗保护效果评价58-73
• 引言58-59
• 一、CVB3 小鼠模型的初步建立59-72
• 2.1 仪器和耗材59
• 2.2 材料和试剂59-60
• 2.3 方法60-63
• 2.4 结果63-70
• 2.4.1 286/CV-B3 在BALB/c小鼠的毒力研究63-64
• 2.4.2 确定小鼠模型攻毒剂量64-65
• 2.4.3 濒死小鼠病理及 286/CV-B3 毒株的组织噬性65-68
• 2.4.4 286/CV-B3 病毒攻击后小鼠不同组织病毒载量的测定68-69
• 2.4.5 CV-B3 灭活疫苗保护效果评价69-70
• 2.5 讨论70-72
• 小结72-73
• 总结73-74
• 综述 肠道病毒多价疫苗——防控手足口病的新方向74-84
• 引言74-75
• 1. 肠道病毒引起疾病的流行75-78
• 1.1 EV-A组病毒75-77
• 1.1.1 EV-A71 与CV-A1676
• 1.1.2 A组其他病毒76-77
• 1.2 EV-B组77-78
• 1.2.1 CV-B377
• 1.2.2 CV-B577-78
• 1.2.3 B组其他病毒78
• 1.3 EV-C组病毒78
• 2．肠道病毒感染引起疾病的临床特征78-79
• 2.1 EV-A组病毒79
• 2.2 EV-B组病毒79
• 3.肠道病毒疫苗研究79-84
• 3.1 EV-A71 疫苗80
• 3.2 CV-A16 疫苗80-81
• 3.3 EV-A71/CV-A16 联合疫苗81-82
• 3.3.1 双价EV-A71/CV-A16 灭活疫苗81
• 3.3.2 双价EV-A71/CV-A16 VLP疫苗81-82
• 3.4 EV-B组疫苗82-84
• 参考文献84-97
• 缩略词表97-98
• 附表98-103
• 个人简历及发表文章目录103-105
• 致谢10

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 吴星;梁争论;;肠道病毒71型实验室诊断研究进展[J];微生物学免疫学进展;2012年04期

  本文关键词：江苏省HFMD病原谱研究及柯萨奇B3疫苗评价小鼠模型的初步建立，，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：264504