铜绿假单胞菌P型ATP酶PA1429调控喹诺酮信号系统和细菌毒性的研究

发布时间：2020-05-01 00:42

【摘要】：铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)是一种重要的条件致病菌,能够引起泌尿系统和呼吸系统感染。同时,铜绿假单胞菌具有普遍的耐药性和环境适应性。因此,预防和控制铜绿假单胞菌的感染是当前病原微生物学研究中的一项重要课题。铜绿假单胞菌中的群体感应系统(Quorum-sensing,QS)控制着众多致病因子的表达,在其感染过程中起着关键性作用。铜绿假单胞菌群体感应系统是一个非常复杂的调控网络,根据其信号通路的不同分为三种,分别是Las、Rhl以及PQS系统。尽管以前对群体感应系统的调控做了大量研究,但其调控机制尚未完全阐明。本研究通过构建转座突变库,在细菌全基因组水平筛选参与PQS信号合成的基因。我们总共筛选到了11个影响PQS合成酶基因pqsH表达的突变体,并对其中的一个蛋白PA1429进行了深入研究。结果表明,PA1429基因缺失突变后,PQS的合成基因pqsH,pqsA及PQS的调节基因pqsR的表达水平明显升高。同时,Las系统和Rhl系统相关基因的表达也显著增强,说明PA1429负调节QS系统的表达。进一步的研究发现,PA1429突变后,细菌运动能力增强,生物被膜的形成增多,小鼠急性肺炎感染的毒力升高。此外,PA1429基因缺失使细菌对氧化压力的敏感性升高,且PqsH介导了PA1429对氧化压力的敏感性。综上所述,我们发现了铜绿假单胞菌PA1429是一个全新的QS系统及相关毒力的调控蛋白,并对其调控机制进行了初步研究。本研究结果进一步丰富了对铜绿假单胞菌群体感应系统和毒力调控网络的认识,为铜绿假单胞菌的防控提供了一定的理论基础。
【图文】：

群体感应,铜绿假单胞菌,反应模式,系统级

西北大学硕士专业学位论文，在细菌到稳定期达到最大量[36]。研究发现 PQS 系统同样生、生物被膜的形成等多种毒性因子的表达[34,35]。在这两个系统之间有着连接的作用，一方面 PQS 系统正调控I 基因有正调控的作用；另一方面 PQS 系统受到 Las 系统的控调控[37]。如 PQS 信号分子的合成所需的基因 pqsH、pqsR，并且 pqsR 还受到 RhlR 蛋白的负调控的作用，它们之间有示，铜绿假单胞菌 QS 系统可以在不同的层次上调节各种毒复杂的调控网络[40]。除了这三个系统外,一定还存在许多未亟待我们的进一步探究。

质粒图谱,载体,化学转化,环基

以可以将待检测基因的启动子连于其前端，，使目酶基因表达，表达的荧光素酶催化底物产生发光道载体的化学发光强弱来反应目的基因在不同环基本过程说明如下[75]：。根据目的基因的启动子序列设计引物，以PAO1产物进行切胶纯化回收。。目的片段和 pMS402 质粒同样用 XhoI 和 BamHI接。利用化学转化将连接产物导入 E. coli DH5α 感受在含 Kan 的 LB 平板上。。将平板上长出的单克隆通过 PCR 扩增验证，正酶切验证。两次验证均正确后得到所需载体，低
【学位授予单位】：西北大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R378

【参考文献】