CNBP在小鼠睾丸发育和精子发生过程中的功能研究

发布时间：2020-05-08 19:22

【摘要】：细胞核酸结合蛋白(CNBP)也称锌指蛋白9(ZNF9),其在脊椎动物中高度保守,以特定的序列方式结合DNA或RNA。它含有七个串联锌指重复序列,由Cys-X2-Cys-X4-His-X4-Cys的14个相同氨基酸组成。到目前为止,已经从人类、小鼠、大鼠、鸡、非洲爪蟾、蟾蜍、斑马鱼和银鲫中克隆了CNBP的cDNA。在低等脊椎动物中的研究数据表明,CNBP在睾丸中高度表达。然而,CNBP在哺乳动物睾丸中的定位和功能尚不明确。为了全面了解CNBP在哺乳动物睾丸中的定位与功能机制,我们利用课题组已有的精原干细胞(SSCs)体外培养平台与生精小管体外培养平台研究了抑制CNBP表达后对新生小鼠睾丸发育和精子发生的影响。首先运用qRT-PCR与Western Blot技术发现在0天和7天小鼠睾丸中CNBP表达较高,从14天开始显著下降,并且在成年小鼠睾丸中CNBP表达非常低。免疫荧光染色发现CNBP定位于小鼠睾丸早期的生殖细胞和支持细胞。此结果提示CNBP是新生小鼠睾丸发育所必需的。进一步我们在体外培养的小鼠睾丸组织和精原干细胞(SSCs)中使用Morpholino对CNBP进行抑制表达。HE染色和免疫荧光染色结果显示CNBP表达下降后,生精小管基膜结构紊乱,支持细胞定位错乱,生殖细胞凋亡以及间质细胞扩增。此外,在该研究中观察到抑制CNBP表达后引起小鼠睾丸中的WNT/β-catenin通路异常活化,而使用该通路的抑制剂XAV939进行干预可以对已有的表型进行挽救。为了观察CNBP抑制后引起的生殖细胞凋亡是直接效应还是间接效应,我们在体外培养的SSCs中使用Morpholino对CNBP进行抑制表达,结果显示SSCs正常生长。综上所述,CNBP通过调节支持细胞的Wnt/β-catenin通路来维持小鼠睾丸发育和精子发生。
【图文】：

不同时间点小鼠睾丸中Cnbp的mRNA表达水平

我们使用 qRT-PCR 检测小鼠不同时间点睾丸 Cnbp 的 mRNA 表达水平。结果显示在 0 天和 7 天睾丸中 Cnbp 表达较高，从 14 天开始显著下降，，并且在成年小鼠睾丸中 Cnbp 表达非常低（图 1）。之后我们通过 Western Blot进行蛋白水平的表达检测，其结果与mRNA表达模式是 致的（图2A和B）。图 1 不同时间点小鼠睾丸中 Cnbp 的 mRNA 表达水平。以 0 d 表达水平为参照，各时间点与之比较，0-7 d Cnbp 处于高表达水平，从 14 d 开始显著下降，至成年几乎不表达（*** p<0.001）。
【学位授予单位】：南京医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R339.21

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 秦建华;迪丽奴尔·艾尔肯;赛米热·沙塔尔;卡丽比奴尔·艾尔肯;玉苏浦·马合木提;依日扎提·艾力;崔赛赛;努尔斯曼古丽·买买提明;陈邬锦;白生宾;;过量氟对小鼠睾丸中骨钙素表达的影响[J];中华男科学杂志;2017年09期

2 田洪成;马良宏;马会明;杨晓霞;耿芝;马文智;裴秀英;王燕蓉;;单次热应激对小鼠睾丸雄激素受体的影响[J];宁夏医学杂志;2016年04期

3 付璐璐;郑连文;徐耀宏;张静文;梁文君;高利伟;胡文宇;王春强;;神经生长因子对小鼠睾丸支持细胞生理状态影响初探[J];中国实验诊断学;2014年03期

4 黄良田;促甲状腺激素释放激素受体基因在小鼠睾丸中的表达[J];第四军医大学学报;1997年03期

5 魏庆义;;碳酸铊染毒六个月对小鼠睾丸和附睾形态的影响[J];卫生研究;1987年05期

6 汪宗越,魏凌珍,孙美芳;萘对小鼠睾丸染色体畸变试验[J];安徽医科大学学报;1988年03期

7 梁U

本文编号：2655040