【摘要】：本论文共分为四章内容。第一章文献研究较为系统地总结了丹参茎叶的资源性化学成分和药理学作用,为丹参茎叶资源开发利用及其产业化提供了科学依据。基于现代研究,对非啮齿类模式生物果蝇、秀丽隐杆线虫和斑马鱼在药物筛选与药效评价中的优势以及应用进行了综述,为非啮齿类模式生物平台的建立与开发提供了有力的参考与借鉴。第二章基于果蝇和线虫模型的丹参茎叶抗衰老资源价值评价研究1.采用UPLC法对丹参根部提取物(SM)、丹参茎叶提取物(DJ)、丹参根部总酚酸部位(SMPA)和丹参茎叶总酚酸部位(DJPA)中酚酸类成分原儿茶醛、丹参素、咖啡酸、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B、丹酚酸A和丹酚酸C进行了含量测定,酚酸类成分的总含量分别为13.58%、12.04%、66.31%和66.32%,结果表明丹参根和茎叶中的酚酸类成分总量相当。2.利用模式生物果蝇,以寿命为指标,评价丹参根及丹参茎叶的提取物和总酚酸的抗衰老活性。进食量实验结果显示,与对照组相比,各组均无显著性差异,提示各药物的浓度设定均为合理,且丹参茎叶提取物和丹参提取物对果蝇的进食量无干预作用;与对照组相比,SM、DJ、SMPA和DJPA处理后果蝇寿命均得到不同程度的延长,提示丹参根及茎叶的提取物和总酚酸部位具有显著的抗衰老活性;经过6.0 mmol·L-1 PQ或0.6%SDS的氧化损伤,与对照组相比,7d后模型组果蝇的存活率显著降低(P0.001);与模型组相比,各组给药果蝇的存活率均无显著变化,提示丹参根部及地上茎叶的提取物和总酚酸都无法逆转0.6%SDS或6.0 mmol·L-1 PQ造成的致死率。3.利用模式生物果蝇,以体重,超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活力,氧化损伤后存活率,肠道上皮细胞凋亡数为指标,探究丹参根及丹参茎叶的提取物和总酚酸的抗衰老作用机制。结果表明,丹参根及茎叶的提取物和总酚酸部位具有抗氧化活性,均能使果蝇的SOD、CAT活力发生不同程度的提高(P0.05),这可能是提高果蝇寿命的原因之一;各组果蝇体重无显著性差异,说明丹参根及茎叶提取物和总酚酸部位对果蝇的体质量无显著影响;丹参茎叶提取物对于百草枯(PQ)诱导的快速老化模型具有一定的保护作用,能够降低中肠的肠上皮细胞凋亡率(P0.05),减少中肠成肠干细胞数(P0.05),表明丹参茎叶具有显著抗肠道老化作用,这可能是其延长寿命的原因之一。4.利用模式生物秀丽隐杆线虫,以寿命为指标,评价丹参根及丹参茎叶的提取物和总酚酸的抗衰老活性。与对照组相比,50μg·mL-1的SM,100μg·mL-1的DJ,25μg·mL-1、50 μg·mL-1、100 μg·mL-1的 SMPA,25 μg·mL-1、50 μg·mL-1的 DJPA 均能不同程度地延长线虫的平均寿命和最高寿命(P0.05或P0.01)。5.以线虫为模式生物,以肠道活性氧含量、头部摆动、身体弯曲频率、咽泵行为、过氧化物酶和超氧化物歧化酶活性和抗氧化相关基因表达量为指标,探究丹参根及丹参茎叶的提取物和总酚酸的抗衰老作用机制。结果显示,与对照组相比,各给药组线虫头部摆动频率、咽泵运动频率和身体弯曲频率均无显著差异,DJ处理后,线虫体内sod-1、ctl-2、mtl-1、mtl-2、hsp-16.1和hsp-16.2基因的相对表达量显著上调,SM处理后,线虫体内的sod-1、sod-2、ctl-2和mtl-1基因表达显著上调。与对照组相比,百草枯处理后,模型组线虫出现肠道的ROS含量显著提升(P0.01),头部摆动频率和咽泵行为均无显著差异,身体弯曲频率显著上升(P0.05),CAT和SOD活力显著下降(P0.01);与模型组相比,丹参根部提取物和丹参茎叶提取物处理后,线虫肠道ROS含量显著降低(P0.05或P0.01),身体弯曲频率显著降低(p0.05),CAT相对活力显著提升(P0.05)。表明丹参根及茎叶提取物和总酚酸具有抗氧化活性,丹参茎叶的抗衰老活性可能与上调氧化应激相关基因sod-1、ctl-2和mtl-1的表达有关。第三章基于果蝇代谢紊乱模型的丹参茎叶资源价值评价研究1.采用高糖诱导的果蝇代谢紊乱模型,以进食量,体重,葡萄糖、三酰甘油和蛋白质的含量,成蛹时间为指标,对丹参茎叶进行活性评价。实验结果显示,与对照组相比,模型组果蝇体内葡萄糖、三酰甘油水平显著上升(P0.05);与模型组相比,达美康阳性药物组、丹参茎叶提取物中剂量组和高剂量组果蝇体内的葡萄糖水平显著降低(P0.05或P0.01),阳性药物组和丹参茎叶提取物高剂量组果蝇体内的三酰甘油水平显著下降(P0.05 或 P0.01)。2.采用果蝇代谢紊乱模型,以氧化应激和参与血糖调节的相关基因表达量为指标,对果蝇的代谢物进行分析,探究丹参茎叶对果蝇代谢紊乱模型的作用机制。结果显示,与对照组相比,模型组果蝇的dFOXO、Ilp5和l(2)efl基因表达显著下调,upd2基因显著上调;与模型组相比,阳性药物组果蝇dFOXO、l(2)efl基因显著上调;丹参根部提取物组Ilp5基因显著上调,srl和upd2基因显著下调;丹参茎叶提取物组Ilp5和l(2)efl基因表达显著上调,upd2基因显著下调。与模型组相比,丹参茎叶提取物处理后,果蝇的代谢水平有所回调,分析得到17个潜在生物标志物和4个主要代谢通路。提示丹参茎叶提取物在果蝇体内可能是通过调节dFOXO、Ilp5、l(2)efl和upd2的表达量,影响组氨酸代谢、甘油磷脂代谢、戊糖和葡萄糖醛酸盐相互作用和甘油酯代谢等代谢通路,从而调节果蝇的糖脂代谢。第四章基于斑马鱼模型的丹参茎叶资源价值评价研究1.用25 μmol·L-1的泼尼松龙诱导建立斑马鱼骨质疏松模型,以斑马鱼头部骨骼染色面积和染色光密度值为指标,以15 μg·mL-1依替膦酸二钠为阳性药,探讨丹参茎叶提取物(12.5、25、50、100、200μg·mL-1 对斑马鱼骨质疏松模型的影响。结果显示,与对照组相比,模型组斑马鱼头部骨骼染色面积和染色光密度值显著减少(P0.01);与模型组比较,阳性药物组和丹参茎叶提取物100 μg·mL-1组能够使斑马鱼头部骨骼染色面积显著增加(P0.05),阳性药物组和丹参茎叶提取物50、100和200 μg·mL-1组染色光密度值显著增加(P0.01或P0.05),表明丹参茎叶提取物具有显著的抗骨质疏松活性。2.利用苯肼诱导斑马鱼血栓模型,以抗血栓效率为指标,以阿司匹林为阳性药,评价丹参茎叶的活血化瘀作用。结果表明,与对照组相比,模型组斑马鱼的尾部静脉形成了显著的血栓,心脏红细胞染色强度显著降低;模型组相比,阳性药物组和丹参茎叶提取物50～200μg·mL-1组心脏红细胞染色强度和抗血栓效率显著提升(P0.05或P0.001),丹参茎叶提取物的EC50为57.17 μg·mL-1,提示丹参茎叶提取物能有效抑制该模型斑马鱼的血栓形成。用VEGF受体酪氨酸激酶抑制剂Ⅱ诱导斑马鱼血管缺损模型,和节间血管完整指数为指标,评价丹参茎叶的促血管生成作用。结果表明,与对照组相比,模型组斑马鱼节间血管指数显著降低,kdrl、flt-1、vWF和VEGF-A的表达量显著下调;与模型组相比,丹参茎叶能够使斑马鱼节间血管数显著增加(P0.05或P0.01),上调kdrl、flt-1、vWF和VEGF-A的基因表达量。提示丹参茎叶提取物具有显著的促血管生成作用,其作用机制可能与调节血管新生相关基因的表达有关。
【图文】：
图１－２－１果蝇雌雄对比图逡逑Ｆｉｇ．邋１－２－１邋Ｃｏｎｔｒａｓｔ邋ｏｆ邋ｍａｌｅ邋ａｎｄ邋ｆｅｍａｌｅ邋ｆｌｙ逡逑１．．４
３实验结果逡逑３．１丹参茎叶对果蝇进食量的影响逡逑由图２－１－２所示，与Ｎ组相比，，各组果蝇的进食量均无显著性差异，结果提示各组药逡逑物的浓度设定均在合理范围内，且丹参茎叶对果蝇的进食无显著的干预作用。逡逑０．１２－１逦逡逑？邋Ｉ邋Ｔ邋１邋Ｉ邋Ｔ逡逑｜邋００８＇＾邋Ｉ邋Ｉ邋ｌｌｌ＾ｌｌｌｌｌ逡逑０．０４－逦｜逦Ｍ邋ｊ逦：逡逑＜逡逑０邋００ＩＬｒｌ琴琴＿丨？丨丨丨NＬｒｌｌ逡逑—逡逑图２－２－１不同药物对果蝇进食量的影响土邋＼邋ｎ邋＝邋３）逡逑Ｆｉｇ．邋２－２－１邋Ｔｈｅ邋ｅｆｆｅｃｔ邋ｏｆ邋ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ邋ｄｒｕｇｓ邋ｏｎ邋ｔｈｅ邋ｉｎｔａｋｅ邋ｏｆ邋ｆｒｕｉｔ邋ｆｌｉｅｓ邋（Ｆ邋土邋？邋＝邋３）逡逑２７逡逑
【学位授予单位】：南京中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285.5;R-332
【参考文献】
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本文编号：
2657126
