P2X4R过表达对帕金森病模型大鼠脑内白介素表达的作用

发布时间：2020-05-13 19:53

【摘要】：目的通过本研究,探讨过表达P2X4R对6-羟基多巴(6-OHDA)诱导的帕金森病(Parkinson’s disease,PD)大鼠模型中黑质内白介素-1β(Interleukin-1β;IL-1β)、白介素-18(Interleukin-18;IL-18)表达的影响,从而研究P2X4R及其介导炎性因子IL-1β以及IL-18的表达在PD发病机制中的作用。方法采用200~250 g Wistar雄性大鼠,按照完全随机原则分为6组,每组大鼠采用以下不同的处理方法:1.对照组:大鼠左侧黑质定位注射含0.02%抗坏血酸的生理盐水;2.6-OHDA组:大鼠左侧黑质定位注射6-OHDA;3.目的基因阴性对照(RNAP2X4)组:大鼠左侧黑质定位注射携带过表达P2X4R的目的慢病毒;4.RNA-P2X4+6-OHDA组:大鼠经左侧黑质定位注射携带过表达P2X4R的目的慢病毒1周后,再次于左侧黑质定位注射6-OHDA;5.空载病毒阴性对照(P2X4-NC)组:大鼠左侧黑质定位注射空载阴性病毒;6.P2X4-NC+6-OHDA:大鼠经左侧黑质定位注射空载阴性病毒1周后,再次于左侧黑质定位注射6-OHDA。根据以上不同处理,各组大鼠造模完成2周后,分别给予腹腔注射阿扑吗啡进行行为学检测,筛选造模成功(右侧旋转速率≥7/min)大鼠继续进行后续实验。于造模4周后将各组造模后大鼠以10%水合氯醛腹腔注射麻醉后断头取脑,取出脑组织分别进行不同处理保存备用。通过免疫荧光染色方法检测各组大鼠脑组织黑质中的TH阳性多巴胺能神经元数量的变化情况,应用荧光定量PCR技术检测P2X4R、IL-1β以及IL-18在各组大鼠脑组织黑质中的m RNA相对表达量,应用Western blot法分别检测各组黑质中P2X4R、IL-1β以及IL-18蛋白表达水平。结果1.荧光定量PCR结果显示:与对照组相比,6-OHDA组、P2X4-NC+6-OHDA组模型大鼠脑组织黑质中P2X4R、IL-1β及IL-18的m RNA含量显著增多(P0.001);与P2X4-NC+6-OHDA组比较,RNA-P2X4+6-OHDA组模型大鼠脑组织黑质中P2X4R的m RNA含量显著增多(P0.01),IL-1β的m RNA含量显著增多(P0.05),IL-18的m RNA含量显著增多(P0.001),差异有统计学意义。2.免疫荧光染色结果显示:与对照组比较,6-OHDA组、P2X4-NC+6-OHDA组模型大鼠脑组织黑质中TH阳性多巴胺能神经元计数显著减少(P0.001);与P2X4-NC+6-OHDA组比较,RNAP2X4+6-OHDA组模型大鼠黑质TH阳性多巴胺能神经元数量减少(P0.001),差异有统计学意义。P2X4-NC组和RNA-P2X4组模型大鼠脑组织黑质中TH阳性多巴胺能神经元数量与对照组进行比较,结果无显著差异。3.Western blot结果显示,与对照组相比,6-OHDA组、P2X4-NC+6-OHDA组模型大鼠脑组织黑质中P2X4R、IL-1β及IL-18的蛋白相对表达量增加(P0.001);与P2X4-NC+6-OHDA组比较,RNA-P2X4+6-OHDA组模型大鼠脑组织黑质中P2X4R的蛋白相对表达量增加(P0.01),IL-1β的蛋白相对表达量增加(P0.001),IL-18的蛋白相对表达量增加(P0.05),差异有统计学意义。结论通过本研究结果显示,通过慢病毒介导P2X4R过表达可上调大鼠黑质中炎性因子IL-1β及IL-18的表达,从而对多巴胺能神经元有一定损伤作用,对PD的发生发展过程产生影响。
【学位授予单位】：青岛大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R742.5;R-332

【参考文献】